怎样制作水牛冷冻精液？

什么是奶山羊精液冷冻保存？

奶山羊精液冷冻保存就是将采得的奶山羊精液处理后，保存 于液氮（-196X：)中的超低温条件下，以达到长期保存和便于运输 精液的目的。奶山羊冷冻精液制作方法和有关技术有以下几点。 (1) 稀释液的配制取果糖1。 5 g，乳糖10。5 g，加蒸馏水 100 mL，溶解过滤，隔水煮沸消毒，用灭菌蒸馏水补足消毒过程中 损失的水量，配成基础液。待温度降到30X：以下，取基础液80 mL，加卵黄20 mL，加青霉素、链霉素各5万~10万IU配成一 液。 然后取一液93 mL，加甘油7 mL配成二液。 (2) 稀释与平衡采得的精液，先检查活率、密度，合格者进行 稀释。奶山羊精液的稀释与平衡...全部

   奶山羊精液冷冻保存就是将采得的奶山羊精液处理后，保存 于液氮（-196X：)中的超低温条件下，以达到长期保存和便于运输 精液的目的。奶山羊冷冻精液制作方法和有关技术有以下几点。 (1) 稀释液的配制取果糖1。
  5 g，乳糖10。5 g，加蒸馏水 100 mL，溶解过滤，隔水煮沸消毒，用灭菌蒸馏水补足消毒过程中 损失的水量，配成基础液。待温度降到30X：以下，取基础液80 mL，加卵黄20 mL，加青霉素、链霉素各5万~10万IU配成一 液。
  然后取一液93 mL，加甘油7 mL配成二液。 (2) 稀释与平衡采得的精液，先检查活率、密度，合格者进行 稀释。奶山羊精液的稀释与平衡方法多用一次稀释法或二次稀释 法。一次稀释法简单易行，为近几年生产实践中多用，并取得了满 意的效果。
  笔者认为,它的优点在于对精子的刺激次数少。由于是一次性操作，污染、温度变化的机会减少。方法是将采得的精液 与稀释液的二液按稀释比例，一次加人。稀释后的精液包8层纱布，放人3~4亡冰箱中平衡2~2。
  5 h立即冻制。 二次稀释法是分二步达到稀释目的。它的优点是减少甘油对 精子的毒害。第一次稀释与平衡是先取一液在等温条件下，按精 液1:0。 5稀释，然后用8层纱布包好，连同注射器、二液一起放人 3~4t：冰箱中平衡2~2。
  5h。第二次平衡与稀释是在冰箱中按 原精总量的1:1比例,缓缓将二液加人经过一次稀释平衡的精液 中，再平衡15 min后立即冻制。 (3) 冷冻冷冻前对所用器械进行紫外线消毒。冻精分为颗 粒冻精和细管冻精。
   ① 颗粒冻精制作:颗粒冻精的优点是制作设备简单，缺点是解 冻后精子活率往往不一致。初冻温度为-90〜-100 X：。将液氮 盛人铝盒做好的冷冻器或广口保温瓶中，液氮面距口缘约7 cm。把聚四氟乙烯塑料冷冻板或铜纱网浸人液氮3 min。
  再取出平放在 泡沫塑料垫上悬浮于液氮面上。冷冻板与液氮表面应保持1 cm 的距离。加盖3 min后开盖,用预冻后的玻璃滴管吸取降温平衡后的精液，按每粒0。1 mL剂量连续不断地滴冻在冷冻板上。
  滴 定后加盖4 min，待颜色变白发亮时,将冷冻颗粒轻轻铲下收集， 按每小包50粒分装于纱布袋内，加上标签，标签上记录种羊号，制作日期，移入液氮罐提筒中保存。 ② 细管冻精的制作:稀释平衡后的冻精在4X：环境下,先用细管分装设备分装入0。
  25 mL特制细管内，再经超声波封口后喷墨 印上标记，置于液氮面上，初冻经-90 ~ -100€下保持5 min 后，装入袋中浸人液氮中保存。 (4) 保存制作合格的冻精，应保存于液氮中。
  颗粒冻精应用 纱布袋盛放，用小细绳系于液氮中。小绳上端的注明标签固定于 罐口外，使之取用方便。小绳要防止缠绕。冻精的包装上必须明 确注明奶山羊品种、编号、生产日期、精子活力、数量，再按号装人液氮罐提筒内，浸人液氮中保存。
  要定期添加液氮,保证不使冻精 露于液氮面之上。液氮总量不能少于2/3。从液氮中提取冻精 时，不能提出罐口外，而应置于罐口颈之内。取精速度要快，时间 不应超过5 s，取冻精的镊子应于液氮中预冷。
   (5) 运输运输冻精用专用液氮罐运输。 (6) 解冻冻精在输精前要进行解冻。 ① 颗粒冻精的解冻:分为干湿两种方法。干解冻是先将灭菌 试管置于35~4〇1C温水中恒温2~3 min后，放人冻精，轻轻摇动 至溶化，同时加人1 mL20~30t：的解冻液。
  湿解冻是先将1 mL 解冻液加入灭菌试管中，置35~40t：温水中恒温2〜3 min，投人 奶山羊颗粒冻精，摇动至溶化。解冻液可用维生素氏2注射液，也 可用2。9%柠檬酸钠或1。4%柠檬酸钠加3%葡萄糖液。
  解冻后立即输精，其时间越短，准胎率越高。 ② 细管冻精的解冻:先取一高于细管的烧杯，内装38~40t： 温水，用预冷的镊子快速取出一支冻精细管，投人温水中，注意使棉塞端朝下，封口端朝上。待10 s后取出，用灭菌纱布擦干，再用 专用剪刀剪去封口端〇。
  5~lcm。取样检查精子活力达0。3~ 0。35方可使用。将细管装人专用输精枪中输精。 (7) 液氮罐的使用正确使用液氮罐是冻精安全保存和运输 的保证。液氮罐是JC存液氮和保存冻精的用具。
  盛满液氮的液氮罐中的温度为-196X：的超低温状态，K：存冷冻精液安全可靠。液氮罐是根据液氮的性质和低温学原理设计制造的，使用必须按照 使用规程，谨慎操作。新购来的液氮罐第一次使用前，或者长期未 用的液氮罐在使用之前，应进行仔细检查，在内部完整无损时方可使用。
  使用前6 h以上，应先注人少量液氮预冷，同时检查液氮损 耗情况，合格方可正式使用。向罐内灌注液氮时，如是加压罐，灌 注软管应插至罐的颈管之下。如倒人时，应在罐口插一专用漏斗， 使液氮直接进入罐内。
  如果罐是热罐(常温)开始要慢，少加，先使 罐冷却。灌人液氮后罐内温度很快下降，在开始4〜5 d液氮蒸发 较多，要注意及时补充。液氮罐应由专人保管，专人使用。液氮罐应保存在通风、凉爽、干燥的室内。
  要站立放平，不可倾斜。搬运 或使用时，应小心。罐上不可放置其他物品。 液氮罐必须注意保养，以保证安全使用，延长寿命。使用时 要特别小心，严防碰伤，影响性能。开闭盖塞、充液氮、取出冻精时 注意保护罐颈。
  液氮罐每年应清洗和干燥1~2次，以免水分积 蓄，杂菌增加，并且可以起到防止发生腐蚀罐底现象的发生。洗涤 或干燥时，应倒出液氮，放置2 d，使温度升至01C以上，用40〜 50C的温水及中性洗涤剂清洗，用布擦干后，再用清水冲洗，最后 自然干燥。
  必要时亦可用热风吹干，但温度宜保持40~50t：吹 干，不可高于601C。收起