提取细菌DNA中TES的作用
其实提取细菌基因组DNA并不是要用到上面提到的所有试剂。
TE是用来浮起细菌的。如果是阳性菌的话最好是用溶菌酶处理一下。
SDS可以让细胞裂解,并与核蛋白结合(当然也包括DNA)。蛋白酶K自然是降解蛋白的。 到这一步可以直接用异丙醇沉淀,70%乙醇洗一次(洗去少量的盐分)。凉得差不多再用少量TE溶解就得到DNA了。
当然,在蛋白酶K处理过后,也可以用1。4M NaCl沉淀一下蛋白(DNA在此浓度溶解度增加,而蛋白减小)。 或者用酚:氯仿:异戊醇(25::24:1)PH>7。8抽提,去蛋白。其后依旧用异丙醇沉淀,70%乙醇洗。
CTAB/NaCl功能与SDS相当,但一般用于提取植物基因组...全部
其实提取细菌基因组DNA并不是要用到上面提到的所有试剂。
TE是用来浮起细菌的。如果是阳性菌的话最好是用溶菌酶处理一下。
SDS可以让细胞裂解,并与核蛋白结合(当然也包括DNA)。蛋白酶K自然是降解蛋白的。
到这一步可以直接用异丙醇沉淀,70%乙醇洗一次(洗去少量的盐分)。凉得差不多再用少量TE溶解就得到DNA了。
当然,在蛋白酶K处理过后,也可以用1。4M NaCl沉淀一下蛋白(DNA在此浓度溶解度增加,而蛋白减小)。
或者用酚:氯仿:异戊醇(25::24:1)PH>7。8抽提,去蛋白。其后依旧用异丙醇沉淀,70%乙醇洗。
CTAB/NaCl功能与SDS相当,但一般用于提取植物基因组。收起