乙醇为什么能使DNA变性
甲醇和乙醇等有机试剂可引起DNA分子变性,并且产生一些单链DNA,但是这种变性是可逆的,因此,这种方法提取的DNA可用于很多实验研究,例如:①乙醇引起DNA分子变性是可逆的,DNA的一级结构并没有发生改变,这就为PCR反应奠定基础;②乙醇引起的DNA变性可以恢复,采用温和的DNA提取方法,可用于DNA构想的研究等。 例如,双链DNA中氢键的稳定性与溶液的pH值有很大的关系,当溶液的pH大于12时,氢键被破坏,DNA解离成单链,当溶液回复为中性时,DNA的二级结构重新形成,逐步复性。基本概念:DNA变性指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。 变性时维持双螺旋稳定性的氢...全部
甲醇和乙醇等有机试剂可引起DNA分子变性,并且产生一些单链DNA,但是这种变性是可逆的,因此,这种方法提取的DNA可用于很多实验研究,例如:①乙醇引起DNA分子变性是可逆的,DNA的一级结构并没有发生改变,这就为PCR反应奠定基础;②乙醇引起的DNA变性可以恢复,采用温和的DNA提取方法,可用于DNA构想的研究等。
例如,双链DNA中氢键的稳定性与溶液的pH值有很大的关系,当溶液的pH大于12时,氢键被破坏,DNA解离成单链,当溶液回复为中性时,DNA的二级结构重新形成,逐步复性。基本概念:DNA变性指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。
变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂,碱基间的堆积力遭到破坏,但不涉及到其一级结构的改变。|||1。DNA不溶于乙醇2。乙醇可以吸附水分子(极性相同),使得溶液中相对的水分子减少,增大了DNA在水中的相对浓度。
3。附:乙醇沉淀DNA需要盐离子,用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷,降低DNA分子间的斥力,才能沉淀完全。 1。为什么用无水乙醇沉淀DNA?用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。
乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。
一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。
折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0。6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。2。在用乙醇沉淀DNA时,为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0。
1~0。25mol/L?在pH为8左右的溶液中,DNA分子是带负电荷的,加一定浓度的NaAc或NaCl,使Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀,当加入的盐溶液浓度太低时,只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合,这样就造成DNA沉淀不完全,当加入的盐溶液浓度太高时,其效果也不好。
在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响DNA的酶切等反应,必须要进行洗涤或重沉淀。|||1。DNA不溶于乙醇 2。乙醇可以吸附水分子(极性相同),使得溶液中相对的水分子减少,增大了DNA在水中的相对浓度。
3。附:乙醇沉淀DNA需要盐离子,用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷,降低DNA分子间的斥力,才能沉淀完全。 1。为什么用无水乙醇沉淀DNA? 用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。
乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。
一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。
折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0。6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。 2。在用乙醇沉淀DNA时,为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0。
1~0。25mol/L? 在pH为8左右的溶液中,DNA分子是带负电荷的,加一定浓度的NaAc或NaCl,使Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀,当加入的盐溶液浓度太低时,只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合,这样就造成DNA沉淀不完全,当加入的盐溶液浓度太高时,其效果也不好。
在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响DNA的酶切等反应,必须要进行洗涤或重沉淀。|||不懂,但是我知道乙醇会使DNA变性,使蛋白质变性|||乙醇会使DNA变性,使蛋白质变性。|||没有这么严重吧,估计有点离谱。
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