琼脂糖凝胶电泳实验失败原因?
可能性太多了。 1。 你跑胶一般都要放MARKER或者叫DNA LADDER吧,这个MARKER除外对DNA标记大小以外, 还可以用来监控ELECTROPHORESIS的质量, 如果MARKER显示而DNA没显示, 说明ELECTROPHORESIS正常而DNA有问题, 如果MARKER和DNA都没有显示, 说明是你的电永出现了问题。 ELECTROPHORESIS的可能问题有, 1。 ELECTROPHORESIS BUFFER浓度问题,2。 BUFFER太陈旧了从而失效 3。 跑过了(根据SIZE来看)2。 如果证明是DNA复制也就是PCR的问题, 可能性就太多了。 具体包括你...全部
可能性太多了。 1。 你跑胶一般都要放MARKER或者叫DNA LADDER吧,这个MARKER除外对DNA标记大小以外, 还可以用来监控ELECTROPHORESIS的质量, 如果MARKER显示而DNA没显示, 说明ELECTROPHORESIS正常而DNA有问题, 如果MARKER和DNA都没有显示, 说明是你的电永出现了问题。
ELECTROPHORESIS的可能问题有, 1。 ELECTROPHORESIS BUFFER浓度问题,2。 BUFFER太陈旧了从而失效 3。 跑过了(根据SIZE来看)2。 如果证明是DNA复制也就是PCR的问题, 可能性就太多了。
具体包括你所使用的PCRBUFFER: 浓度问题(需要1X), 盐析问题(有时候放置太久其中的SALT会析出, 溶解不透彻就会失效),氯化镁浓度问题。 DDNTP: 浓度问题(可能配得浓度不够),陈旧性问题。
TAQ: 你的酶有可能失效。 PRIMER问题: 你的PRIMER可能NOT WORK。 也可能你的ANNEALING TEM有问题, 初次使用PRIMER的时候建议作温度的GRADIANT TEST, 测试最佳ANNEALING TEM。
PRIMER也可能太陈旧了, 浓度或高或低。PRIMER容易行程DIMER。PCR PROGRAMME的设置问题: 这个最简单, 建议仔细过一遍。总之, 如果是PCR的问题, 建议每次保持其他不变, 只改变其中的一项来把问题找出来, 另外提醒你最好要作POSITIVE 和NEGATIVE CONTROL。
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