什么是菌种复壮？

    菌种复壮的方法有：1。 复壮的原理从菌种退化的演变过程来看，开始时所谓“纯”的菌株，实际上 其中已经包含着一定程度的不纯的因素了；同样，到后来整个菌种虽已退化了，但其不纯的菌株中仍有少量保持优良性状的细胞，即还有少数尚未衰退的个体存在。
  这样，人们就可以通过人工选择法从中分 离筛选出那些保持原有优良性状的个体，使菌种获得纯化，这就是复 壮。  很明显，这种狭义的复壮是一种消极措施，它是指在菌种已经发生退化的情况下，通过纯化分离和测定生产性能等方法，从退化群体 中找出尚未退化的个体，经过进一步繁殖，以达到恢复该菌种原有典 型性状的一种措施。
  而目前生产中提倡的“广义的复壮”，应该是一项积极措施，即在菌种生产性能尚未退化前，就经常有意识地进行纯 种分离与生产性能的测定工作，以保持菌种稳定的生产性状，甚至使 其逐步有所提高。  2。
   复壮的主要方法(1) 纯种分离。通过纯种分离，可以把一部分退化菌种的细胞群体中仍保持原有典型性状的单细胞分离出来，经过扩大培养，就可以 恢复原有菌株的典型性状。常用的分离纯化方法很多，一类较粗放， 一般只能达到“菌落纯”的水平，即从“种”的水平上来说是纯的；另一类是较精细的单细胞或单孢子的分离方法，它可以达到“细胞 纯”，即达到菌株纯的水平。
    虽然食醋酿造生产中用的菌种难免会发生退化，但是仍可以通过 细致的工作来使生产中的菌种退化现象降低到尽可能小的程度。另一方面，菌种复壮工作也必须定期进行才能保证优良的生产用菌种不断档。
  实际生产中退化的菌种通常可以通过“菌落纯”水平的纯种分 离，并配合测定生产性能来恢复原有菌株的优良性能。  如平板表面涂布法，首先把最适合这种菌种生长的培养基配制好，然后制备菌种的 菌（孢子）悬浮液，将适量的菌悬液涂抹于培养基平板上，在最佳的 生长温度下培养成熟，挑选出几株茁壮的单菌落菌体进行培养，测定其性能，经多次重复后，便可得到与原菌株性能相近的菌株并能重新 应用于生产中。
    下面以泸酿3。 042米曲霉的复壮为例，来说明食醋酿造中的菌种 复壮。泸酿3。 042米曲霉是食醋生产企业常用的曲霉菌种，此菌株适宜 固态制曲，蛋白酶活力强，还具有生长快、易管理、较粗放、原料全氮利用率稳定等特点。
  但此菌株经过长期的移种和保藏后，往往出现 下述两种不良情况：一是保藏不妥，菌种出现杂菌污染；二是优良性 状减弱或消失，产生菌种退化。  这些情况都会给食醋的产量和质量带来不利影响。
  为此，定期进行生产菌种的纯化复壮，检查菌种的性 能，是防止菌种污染与退化、保证食醋优质高产的有效措施之一。首先，要对优良性状衰退的菌种进行初筛。初筛时，采用稀释平 板法。准确吸取15。 OmL酪蛋白合成培养基于已灭菌的平皿中，待凝固后转置37°C培养箱中倒置培养48h，作无菌试验并蒸发培养基表面 水分。
    无菌操作加入适当稀释度（10_7〜10。5)的孢子悬浮液O。lmL， 再用消过毒的玻璃涂布棒涂布均。匀，置于（30±1)°C培养箱中培养，随着单个菌落的生长，菌落周围逐渐产生透明圈。
  培养至56h进行观 察，以透明圈直径与菌落直径的比值K作为初筛依据。将K值大的 单菌落挑接斜面试管并编号，置于（30±1)°C培养箱培养72h后，置4°C冰箱保藏，作三角瓶复筛用。  初筛时，挑选出K值最大的菌株， K值最大的说明其分解蛋白质的能力最强。
  为了取得K值的准确性， 在初筛过程中必须使用大小一致的平皿，工作台面要水平，酪蛋白合成培养基必须定量倒人培养皿，并立即摇勻，以保证培养基凝固时厚薄均匀，以免产生不必要的K值误差。其次，对初筛所得的K值最大的菌种进行复筛，分别测定其蛋 白酶活力和成熟孢子数。
    取初筛挑接的菌种斜面，同退化菌种和原始菌种作对照，在无菌室内接种，每支接种3个三角瓶培养基，于28〜 30°C下培养72h。取培养成熟后的三角瓶种曲50g (同支菌种所接的 3个三角瓶混匀抽样），分别测定中性蛋白酶活力和孢子数。
  通过筛选菌种、退化菌种以及出发菌种的对比，来确定复壮效果的优劣。  (2) 淘汰法。即淘汰已经衰退的个体。有人曾对产生放线菌素的的分生抱子，采用-30〜-10°C的低温处理 5〜7d，使死亡率达到80%。
  结果发现，在抗低温的存活个体中，留下了未退化的健壮个体，从而达到了复壮的目的。(3) 宿主体内复壮法。即通过在宿主体内生长进行复壮。  对于寄生性微生物的退化菌株，可通过接种至相应的宿主体内的措施来提高 它们的活性。
  例如，经过长期人工培养的会 发生毒理减退和杀虫效率降低等现象。这时，可以将已退化的菌株感染菜青虫等的幼虫，然后从病死的虫体内重新分离出典型的产毒菌 株。如此反复进行多次，就可以提高菌株的杀虫效率。
    在酿醋生产过程中，菌种退化会给生产水平带来较大的波动，如 种曲的孢子数目减少，酶活力降低，会影响食醋产品的氨基酸含量。而造成生产水平波动的因素很多，在未查明原因之前，人们往往会认 为是菌种退化了。
  其实，首先应该认真分析是生产中的各项不稳定因 素引起的暂时变化，还是真正的菌种退化引起的生产水平的波动。  若是由于菌种退化引起的生产水平的降低，则应及时进行菌种的分离纯 化和复壮工作。