如何定性诊断肉兔出血症病毒和弓形虫混合感染症?
涂片镜检无菌操作,取病死兔的肝、肺、脾和淋巴结刮取物 分别抹片,选用瑞特染色法染色,镜检发现数量不等、一端稍尖另一 端钝圆、呈香蕉形或弓形的虫体,其胞浆呈浅蓝色、有颗粒,核呈深蓝 紫色,偏向钝圆的一端,每一个视野中散布单个、成双或多个虫体。 根据检验的结果,判定病死兔多种实质脏器中,均存在数量 不等的弓形虫。分离培养无菌操作,取新鲜病死兔的肝脏、脾脏、心血刮取 物和胸腔积液,分别接种于普通琼脂培养基和血清培养基上,置 37 °C温箱中培养24〜48小时后观察,均未见细菌生长。 回归试验无菌操作,取病死兔的肺、肝、肾等实质脏器病料, 按1 : 10加入灭菌生理盐水后,用组织匀浆搅拌器制成...全部
涂片镜检无菌操作,取病死兔的肝、肺、脾和淋巴结刮取物 分别抹片,选用瑞特染色法染色,镜检发现数量不等、一端稍尖另一 端钝圆、呈香蕉形或弓形的虫体,其胞浆呈浅蓝色、有颗粒,核呈深蓝 紫色,偏向钝圆的一端,每一个视野中散布单个、成双或多个虫体。
根据检验的结果,判定病死兔多种实质脏器中,均存在数量 不等的弓形虫。分离培养无菌操作,取新鲜病死兔的肝脏、脾脏、心血刮取 物和胸腔积液,分别接种于普通琼脂培养基和血清培养基上,置 37 °C温箱中培养24〜48小时后观察,均未见细菌生长。
回归试验无菌操作,取病死兔的肺、肝、肾等实质脏器病料, 按1 : 10加入灭菌生理盐水后,用组织匀浆搅拌器制成匀浆。将勻 浆冻融3次,用纱布过滤后,注射给2只75日龄的未进行兔出血症 免疫的敏感兔,每只2毫升,并同时滴鼻和点眼各3毫升。
2只兔分别于36小时和49小时死亡,症状和病变与自然发病兔基本一致。取病死兔肝脏匀浆清液用人类的“0型”红细胞进行血液凝集试 验,结果均为阳性。在病死兔的肝脏、脾脏和胸腔积液的涂片中,均检出弓形虫。
金清学诊断无菌操作,取6只病死兔的肝、肺和脾脏磨碎, 用灭菌生理盐水制成10%悬液,经每分钟3 000转离心30分钟,取上清液在96孔V型微量滴定板上,按常规法,用人类“O型”红细胞 进行血凝试验,其中3份(3/6)的血凝价为1 : 512,3份(3/6)的血凝价为1 : 256,证明病料中均有大量的兔出血症病毒。
用已知兔出血症病毒阳性血清,按常规法进行红细胞凝集抑制 试验,结果以上病毒的血凝性,均被该血清抑制,表明病料中的病毒 为兔出血症病毒。小鼠试验无菌操作,取新鲜病死兔的肝脏、肺脏和淋巴结刮 取物,以1 : 5的比例,加入灭菌生理盐水,制成乳剂。
然后,每毫升 加入青霉素1000IU、链霉素100毫克后,置室温中放置1小时,用前 振荡,待颗粒沉淀后,取上清液接种于小鼠。优选6只健康小鼠,分 为甲、乙两组:甲组每只腹腔接种1毫升乳剂,为试验组;乙组腹 腔注射1毫升灭菌生理盐水为对照组。
接种后,每天进行观察,第 70小时甲组中有1只发病,6天后,3只全部发病;病鼠食欲消失。腹 部膨大,有大量腹水,最后死亡。对照组无异常变化。采集病鼠的腹水,涂片,染色,镜检发现弓形虫。色素试验(染色试验DT)这是弓形虫病特有的血清学诊断 方法。
无菌操作,抽取接种试验液72小时以后小鼠的腹水,加灭 菌生理盐水反复离心洗涤2〜3次,制成每毫升含有弓形虫500万个 左右的标准抗原。取病兔的血清,置56 °C水浴中灭能30分钟,用灭 菌生理盐水倍比稀释:1 : 2、1 : 4、1 : 8、1 : 16、1 : 32、1 : 64、 1 : 128。
将按比例稀释的液体各取0。 1毫升,加人正常人血清0。 2 毫升,再加弓形虫抗原0。 1毫升,置37 °C温箱中作用12小时,取出 待冷,加亚甲蓝染色液2〜4滴,振荡5〜6分钟后取出镜检。判断标准为在400倍下镜检,如50%以上不被染色,为阳性。
结果大部分1 : 64或1 : 128稀释液为阳性,表明兔已感染弓 形虫。综合检验的结果,新西兰肉兔群发生的疫情,确诊为出血症 和弓形虫混合感染症。收起