如何定性诊断犊牛肺炎链球菌和支原体混合感染症？

如何定性诊断马粪链球菌和大肠杆菌混合感染症？

分离培养无菌操作。取1号马的脑、心、肝、肾、脾和肺的病料，2号马的脑、脑膜病料分别切成小块各置于小管马丁肉汤中，恒温培养24小时，除1号马的肾和2号马的脑膜不长菌外，其余各管 均为混浊菌液。小鼠试验无菌操作，分别取各管菌液0。 5毫升，腹腔注 射小鼠，均于次日死亡。取死亡小鼠心血，接种于马丁肉汤中，恒温培养24小时，用此菌液0。 2毫升，腹腔注射小鼠，均于3天内死亡。 再取死亡小鼠心血，分别划线于马丁琼脂平皿上，37°C恒温培养24 小时，各平皿均长出大小两种不同的菌落;进一步将大小菌落分开培 养，以作进一步鉴定。 小菌落特征从1号马的脑、心、肝、肺和2号马的脑所分离 的5株“小菌落...全部

  分离培养无菌操作。取1号马的脑、心、肝、肾、脾和肺的病料，2号马的脑、脑膜病料分别切成小块各置于小管马丁肉汤中，恒温培养24小时，除1号马的肾和2号马的脑膜不长菌外，其余各管 均为混浊菌液。小鼠试验无菌操作，分别取各管菌液0。
   5毫升，腹腔注 射小鼠，均于次日死亡。取死亡小鼠心血，接种于马丁肉汤中，恒温培养24小时，用此菌液0。 2毫升，腹腔注射小鼠，均于3天内死亡。 再取死亡小鼠心血，分别划线于马丁琼脂平皿上，37°C恒温培养24 小时，各平皿均长出大小两种不同的菌落;进一步将大小菌落分开培 养，以作进一步鉴定。
  小菌落特征从1号马的脑、心、肝、肺和2号马的脑所分离 的5株“小菌落”，具有以下主要特征:菌落均呈灰白色、湿润、露珠 状;涂片镜检，均为革兰阳性球菌，菌体为圆形和椭圆形，呈单个、成双和少数短链排列;各菌株在马丁肉汤和厌氧肉肝汤中培养后，呈一 致混浊;在含10%绵羊脱纤维血琼脂平皿上，37°C恒温培养48小时 后，不溶血。
  小菌落小鼠试验以1号和2号马脑部培养液各1。 5毫升， 分别静注家兔，数日后，试验兔逐渐消瘦，拒食;病后期，后肢麻痹，尿 失禁，于50天内死亡。从死兔的关节液中，分离到相同的革兰阳性球菌。小菌落生化反应5株“小菌落”均能发醇蔗糖、麦芽糖、 乳糖、半乳糖、果糖、蕈糖、甘露醇和山梨醇，不发酵木糖、菊糖、棉子糖、伯胶糖和鼠李糖;对石蕊牛乳产酸凝固，0。
  1%亚甲蓝牛乳阳性； 在6。 5%氯化钠肉汤和P9。 6肉汤中均能生长;能水解七叶苷，不 能水解淀粉和马尿酸钠。小菌落血清学分群鉴定无菌操作，取1号马和2号马脑分离株的牛心汤培养液，离心后所得菌体，以甲酰胺提取法制得抗原， 分别与已知群别的链球菌高免血清作环状沉淀反应。
  结果均与D 群血清呈阳性反应，与a、c、e、、g、、l、n、0、p、q、r等群血清呈 阴性反应，属于蓝氏D群链球菌;再根据其能发酵山梨醇、不发酵伯 胶糖和不溶血等特点，判定为粪链球菌。大菌落特征从1号马的肝、心、脑、。
  肺和2号马的脑分离的 5株“大菌落”，具有以下主要特征:均呈灰白色菌落，直径为2〜3毫米，并散发臭味，1号马各菌株菌落粗糙，2号马各菌株菌落光滑、圆 整;各菌株涂片镜检，均为革兰阴性短杆菌。8大菌落生化反应各菌株均能发酵葡萄糖、乳糖、果糖、木糖、麦芽糖、蕈糖和山梨醇，不发酵蔗糖、鼠李糖、肌醇和甜醇;对石蕊牛 乳产酸，靛基质和R试验均为阳性;枸橼酸盐试验阴性，V - P试验阴性。
  大菌落动物试验以各菌株的马丁肉汤培养液0。 5毫升，分 别皮下注射体重健康小鼠2只，均不致死;又以0。 6毫升菌液，分别腹腔注射体重健康小鼠2只，均于24小时内死亡，并从死亡的小鼠心血中分离到相同的短杆菌。
  大菌落血清型鉴定综合诸多特性，“大菌落”符合大肠 杆菌主要特性。经用大肠埃希菌“O”抗原的诊断血清检测结果，1号 马脑、心、肝和肺菌株均为0，2号马脑菌株为09。收起