气相色谱内标法计算需要代入规格吗？
甜蜜素是一种常用甜味剂，国标检测方法是气相色谱外标法，分离柱是不锈钢填充柱。以前，由于毛细管柱价格昂贵，使用的不是很普遍，而现在已经得到普遍使用，一般实验室都会配备，而使用填充柱的实验，却越来越少。 本文探讨用毛细管柱内标法检测甜蜜素，使检测效率大大提高，节省大量时间，且准确率高。
甜蜜素化学名称为环己基氨基磺酸钠，于1937年发现，1950年开始生产应用。它是由环己胺和氯磺酸或氨基磺酸或三氧化硫反应后用NaOH处理，再重结晶制得的一种白色结晶粉末，在高甜度甜味剂中，甜度是最低的，甜度为蔗糖的30～80倍。 风味较自然，后苦不明显，热稳定性高，是不被人体吸收的低热能甜味剂。19...全部
甜蜜素是一种常用甜味剂，国标检测方法是气相色谱外标法，分离柱是不锈钢填充柱。以前，由于毛细管柱价格昂贵，使用的不是很普遍，而现在已经得到普遍使用，一般实验室都会配备，而使用填充柱的实验，却越来越少。
本文探讨用毛细管柱内标法检测甜蜜素，使检测效率大大提高，节省大量时间，且准确率高。
甜蜜素化学名称为环己基氨基磺酸钠，于1937年发现，1950年开始生产应用。它是由环己胺和氯磺酸或氨基磺酸或三氧化硫反应后用NaOH处理，再重结晶制得的一种白色结晶粉末，在高甜度甜味剂中，甜度是最低的，甜度为蔗糖的30～80倍。
风味较自然，后苦不明显，热稳定性高，是不被人体吸收的低热能甜味剂。1969年曾因其致畸性的报道而被世界各国禁用，后来由于大量试验表明它并无致畸、致癌等作用，许多国家重又许可使用。我国于1987年开始应用甜蜜素，它是目前我国食品行业中应用最多的一种甜味剂。
甜蜜素含量检测目前有气相色谱检测方法和液相色谱检测方法等。最经典的方法是GB/T5009。97-2003《食品中环己基氨基磺酸钠的测定》。但该方法是外标法，且用的是不锈钢填充柱，在没有自动进样器的条件下，要想定量准确，需要花很长时间。
要准确地确定一个样品的甜蜜素含量，上机部分至少需要15-～20分钟（要求：进样水平非常高的人），而用内标法只需5～10分钟（要求：一般操作者）。
本文采用在提取溶剂正己烷中加入两种内标物质（甲苯和乙酸正丁酯）对甜蜜素经过衍生后的产物进行定量。
1。试验部分
1。1 原理
在硫酸介质中甜蜜素与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱法进行定性和定量。
1。2试剂（所用试剂不做说明皆为分析纯，水为蒸馏水）
1。
2。1 甜蜜素储备溶液：称取1。000 0g甜蜜素（含量≥99。0%），加水溶解并定容至100mL，此溶液浓度为10。00mg/mL，为储备液。置于4℃的冰箱中。本次试验溶液浓度为：10。320 mg/mL
1。
2。2 甜蜜素标准使用溶液：取1。2。1储备液10mL，加水定容至100mL，为使用液，浓度为1。000 0mg/mL。本次试验使用溶液浓度为：1。0320 mg/mL
1。2。3 100g/L硫酸溶液：称取50g浓硫酸，用水定容至500mL。
1。2。4 50g/L 亚硝酸钠溶液：称取25g亚硝酸钠，用水定容至500mL。
1。2。5 正己烷
1。2。6 甲苯(内标)
1。2。7 乙酸丁酯（内标）
1。
2。8 氯化钠
1。3 仪器
1。3。1 岛津GC-14C气相色谱仪（带FID检测器、毛细管进样口、N2000色谱工作站）
1。3。2 DB-5毛细管柱（30m×0。
32mm×0。25μm）或其它类型毛细管柱，如DB-1、DB-1701
1。3。3 离心机
1。3。4 10μL微量进样器
1。4 仪器操作条件
1。4。1 检测器：200℃
1。
4。2 汽化室：180℃
1。4。3 柱温：70℃
1。4。4载气流速（压力）：100kPa
1。4。5氢气流速（压力）：50kPa
1。4。6 空气流速（压力）：60 kPa
1。
5 样品前处理
1。5。1 内标溶液的配置：在正己烷中加入一定量的内标（乙酸丁酯和甲苯）1，加入的量以出色谱峰合适为宜。一般为500mL正己烷中加入内标100μL～200μL。本次实验乙酸丁酯的浓度为0。
1344mg/mL（称量0。0672g乙酸丁酯于装有10mL左右正己烷的25mL容量瓶中，再将溶液转移至500mL容量瓶中并定容至刻度线，摇匀，备用。
1。5。2 标准溶液前处理：吸取1。
2。2标准溶液10 mL于50mL比色管中，加10mL水，摇匀，置于冰浴中。加入5mL50g/L亚硝酸钠溶液，5mL100g/L硫酸溶液，在冰浴中放置30min，并时常摇动，然后准确加入10mL1。
5。1溶剂，5g氯化钠，摇匀后振摇80次。静置分层。吸出正己烷层于10mL带塞离心管中进行离心分层（如有机溶剂和水相很快就有分层或只要进样针能吸出提取的溶剂，就可以不需离心分离这一步骤），吸取正己烷层1μL注入色谱仪进行分析。
算出校正因子2。
1。5。3 液体样品前处理：称取试样20。0g于50mL带塞比色管中，加10mL水。摇匀，置于冰浴中。处理过程同标准溶液前处理1。5。2。吸取正己烷层试样1μL注入色谱仪进行分析。
1。5。4 固体样品前处理：称取已磨碎（剪碎）试样2。0～10。0g（根据样品中甜蜜素含量而定称取质量，使甜蜜素的量在1～10mg之间）于50mL带塞比色管中，加10mL水。一些样品不易溶解，如蜜饯类、山楂等，置于水浴锅中煮沸15min左右，冷却至60℃以下，置于冰浴中。
处理过程同标准溶液前处理1。5。2。吸取正己烷层试样1μL注入色谱仪进行分析。
2 结果与讨论
2。1。1分析方法的线性相关性的测定
分别吸取1。2。1标准溶液1mL、3mL、5mL、10mL、20mL于5个100mL容量瓶中，并定容至刻度，配成浓度分别为0。
1032mg/mL、0。3096mg/mL、0。5160mg/mL、1。0320mg/mL、2。0640 mg/mL的标准溶液。分别吸取以上标准溶液10 mL于5支50 mL比色管中，按1。5。
2方法进行处理。每个标准点分别进样5次，每次进样1μL，以甜蜜素与内标物的质量比为横坐标，甜蜜素与内标物的峰面积比（取五次进样平均值）为纵坐标绘制标准曲线，得线性方程为ｙ＝0。43991ｘ－0。
00088，其线性相关系数为0。99999。（见表1）
由表 1求出相对校正因子及其平均值，结果列于表2
2。1。2分析方法的准确度的测定
从市场上购买一种不含甜蜜素的饮料（样品名称：鲜橙多橙汁饮料 生产单位：昆山统一企业食品有限公司 净含量：2L 生产日期：20060307），称取5份一定量的试样，用移液管分别加入1。
2。2标准溶液1、3、5、10、15mL，按上述气相色谱操作条件测定甜蜜素回收率，结果都在99。7%～101。1%之间。准确度试验数据见表3。
2。1。3分析方法的精密度的测定
从市场上购买一种含有甜蜜素的饮料（样品名称：鲜橙多 生产单位：康裕食品有限公司 净含量：1。
5L 生产日期：20060415），从同一产品中称取五个试样。按1。5。2方法进行处理后，按上述气相色谱操作条件测定甜蜜素含量，得到标准偏差为0。0027，变异系数（RSD）为0。55％。精密度试验数据见表4。
3 结论
综上所述，本方法简便、快速、准确，具有较高的准确度、精密度和回收率，线性关系好，是一种非常可行的分析方法。
注：1用甲苯和乙酸丁酯做内标都可以，可同时加入两种内标（选其中一种作为参照计算），也可以只加其中一种。
本次试验的数据是以乙酸丁酯为内标进行计算而获得的。
2甜蜜素用本方法衍生处理后，在毛细管柱上会出两个峰，一般是刚开始前面的大，后面的很小，但时间长了，后面的峰越来越大，相应的，前面的峰越来越小直至消失，但两个峰面积和是不变的（48小时之内）。
计算校正因子时，用甜蜜素衍生产物的两个峰的面积和计算。检测样品时，两个峰可单独识别并采用同一个校正因子计算，结果相加，也可以使用工作站将峰面积相加，再计算含量。一批样品检测，样品和标准品使用同一浓度的内标溶剂，在计算校正因子时，可将内标物的量假定为1（任一定值皆可），使用非常方便，不需知道加入的内标物的质量。
否则，要称量内标物的质量，精确至0。0001g，再定容至一定体积。算出内标物浓度，再进行校正因子的计算。
。收起
