琼脂糖凝胶电泳法是怎么进行的呢?
琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖为基质的一种电泳方法。现简述如下:
(1)制胶:取琼脂糖约0。2g,加水10ml置水洛加热使溶胀完全,然后加入温热的醋酸-盐盐缓冲液(pH3。0),混匀,趁热将胶液涂布于大小适宜(7。 5cm×2。5cm或9cm×4m)的玻璃板上,厚度约3mm,静置,待凝胶结成无气泡的均匀薄层,即得。
(2)标准晶溶液及供试品溶液的制备:照各药品项下规定配制。
(3)点样与电泳:在电泳槽内加入醋酸.锂盐缓冲液(pH3。 0),将凝胶板置于电泳槽架上,经滤纸桥浸入缓冲液。于凝胶板极端分别点样1μl,立即接通电源,在电压梯度约30V/cm,电流强度1~2mA/cm的条件下,电泳约2...全部
琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖为基质的一种电泳方法。现简述如下:
(1)制胶:取琼脂糖约0。2g,加水10ml置水洛加热使溶胀完全,然后加入温热的醋酸-盐盐缓冲液(pH3。0),混匀,趁热将胶液涂布于大小适宜(7。
5cm×2。5cm或9cm×4m)的玻璃板上,厚度约3mm,静置,待凝胶结成无气泡的均匀薄层,即得。
(2)标准晶溶液及供试品溶液的制备:照各药品项下规定配制。
(3)点样与电泳:在电泳槽内加入醋酸.锂盐缓冲液(pH3。
0),将凝胶板置于电泳槽架上,经滤纸桥浸入缓冲液。于凝胶板极端分别点样1μl,立即接通电源,在电压梯度约30V/cm,电流强度1~2mA/cm的条件下,电泳约20min,关闭电源。
(4)染色与脱色:取下凝胶板,用甲苯胺蓝溶液(0。
1%,W/V)染色,用水洗去多余的染色液至背景无色为止。
(5)定量:选择适宜的检测方法如分光光度法等,以标准晶对照法进行样品的含量测定。
(6)应用:由于琼脂糖凝胶具有较大孔径,因此,琼脂糖凝胶电泳法特别适用于RNA、DNA等核糖核酸类及其衍生物类药物的分离。收起