大肠菌群的证实实验是怎样的？
如下：
(1) 采样及稀释以无菌操作将检样25 g(或25
mL)放于含 有225 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预 置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳鉢内，经充分振摇或研磨做成1 : 10的均匀稀释液。 以800〜1
000 r/min的速度处理1 min，做成 1 : 10的稀释液。用1 mL灭菌吸管吸取1 : 10稀释液1
mL，注 人含有9 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇混匀，做 成1 : 100的稀释液，换用1支1 mL灭菌吸管，按上述操作依次
做10倍递增稀释液。 根据食品卫生要求或对检验样品污染情况 估计，选择3个稀释度，每个稀释度接种3管，也可...全部
如下：
(1) 采样及稀释以无菌操作将检样25 g(或25
mL)放于含 有225 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预 置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳鉢内，经充分振摇或研磨做成1 : 10的均匀稀释液。
以800〜1
000 r/min的速度处理1 min，做成 1 : 10的稀释液。用1 mL灭菌吸管吸取1 : 10稀释液1
mL，注 人含有9 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇混匀，做 成1 : 100的稀释液，换用1支1 mL灭菌吸管，按上述操作依次
做10倍递增稀释液。
根据食品卫生要求或对检验样品污染情况 估计，选择3个稀释度，每个稀释度接种3管，也可直接用样品 接种。
(2) 乳糖初发酵试验即通常所说的假定试验。其目的在于检查样品中有无发酵乳糖产生气体的细菌。
将待检样品接种于乳 糖胆盐发酵管内，接种量在1 mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵 管；1 mL及1 mL以下者，用单料乳糖发酵管。每一个稀释度接 种3管，置（36±1)C温箱内，培养（24±2)h，如所有乳糖胆盐发酵 管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产生者，则按下列程
序进行。
(3) 分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美兰琼脂板 或麦康凯琼脂平板上，置（36±1)X：温箱内，培养18〜24 h，然后 取出，观察菌落形态并做革兰氏染色镜检和复发酵试验。
(4) 乳糖复发酵实验即通常所说的证实试验，其目的在于证 明从乳糖初酵管试验呈阳性反应的试管内分离到的革兰氏阴性无 芽孢杆菌，确能发酵糖产生气体。
在上述的选择性培养基上，挑取
可疑大肠菌群1〜2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置 (36±1)°C的温箱内培养（24±2)h，观察产气情况。凡乳糖发酵 管产气，革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，即报告为大肠杆菌阳性；
凡乳糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报告为大肠杆菌为 阴性。
(5) 报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表报告每100 mL(g)乳品中大肠菌群的最可能数。
大肠菌群最可能数（MPN)检索表
阳性管数 MPN 95%可信限 阳性管数 MPN 95%可信限
0。
1 0。 01 0。
001 上限 下限 0。 1 0。 01 0。 001 上限 下限
0 0 0 <3。0 — 9。5 2 2 0 21 4。5 42
0 0 1 3。
0 0。 15 9。 6 2 2 1 28 8。7 94
0 1 0 3。0 0。 15 11 2 2 2 35 8。7 94
0 1 1 6。 1 1。2 18 2 3 0 29 8。
7 94
0 2 0 6。2 1。2 18 2 3 1 36 8。 7 94
0 3 0 9。4 3。 6 38 3 0 0 23 4。 6 94
阳性管数 MPN 95%可信限 阳性管数 MPN 95%可信限
0。
1 0。 01 0。
001 上限 下限 0。 1 0。01 0。 001 上限 下限
1 0 0 3。 6 0。 17 18 3 0 1 38 8。 7 110
1 0 1 7。
2 1。 3 18 3 0 2 64 17 180
1 0 2 11 3。 6 38 3 1 0 43 9 180
1 1 0 7。4 1。 3 20 3 1 1 75 17 200
1 1 1 11 3。
6 38 3 1 2 120 37 420
1 2 0 11 3。 6 42 3 1 3 160 40 420
1 2 1 15 4。 5 42 3 2 0 93 18 420
1 3 0 16 4。
5 42 3 2 1 150 37 420
2 0 0 9。 2 1。4 38 3 2 2 210 40 430
2 0 1 14 3。 6 42 3 2 3 290 90 1000
2 0 2 20 4。
5 42 3 3 0 240 42 1 000
2 1 0 15 3。7 42 3 3 1 460 90 2 000
2 1 1 20 4。 5 42 3 3 2 1 100 180 4 100
2 1 2 27 8。
7 94 3 3 3 >1 100 420 —
注1:本表采用3个稀释度[0。 1
g(mL)、0• 01 g(mL)和0。 001
g(mL)],每个稀释度 接种3管。
注2:表内所列检样量如改用1 g(mL)、0。
1 g(mU和0。01 g(mL)时，表内数字应 相应降低10倍；如改用0。 01 g(mL)、0。001 g(mL)0。000 1 g(mL)时，则表内数字应相
应提高10倍，其余类推。收起
