如何定性诊断肉兔支气管败血波氏杆菌和出血症病毒混合感染症？

如何定性诊断肉兔出血症病毒和弓形虫混合感染症？

涂片镜检无菌操作，取病死兔的肝、肺、脾和淋巴结刮取物 分别抹片，选用瑞特染色法染色，镜检发现数量不等、一端稍尖另一 端钝圆、呈香蕉形或弓形的虫体，其胞浆呈浅蓝色、有颗粒，核呈深蓝 紫色，偏向钝圆的一端，每一个视野中散布单个、成双或多个虫体。 根据检验的结果，判定病死兔多种实质脏器中，均存在数量 不等的弓形虫。分离培养无菌操作,取新鲜病死兔的肝脏、脾脏、心血刮取 物和胸腔积液，分别接种于普通琼脂培养基和血清培养基上，置 37 °C温箱中培养24〜48小时后观察，均未见细菌生长。 回归试验无菌操作，取病死兔的肺、肝、肾等实质脏器病料， 按1 : 10加入灭菌生理盐水后，用组织匀浆搅拌器制成...全部

  涂片镜检无菌操作，取病死兔的肝、肺、脾和淋巴结刮取物 分别抹片，选用瑞特染色法染色，镜检发现数量不等、一端稍尖另一 端钝圆、呈香蕉形或弓形的虫体，其胞浆呈浅蓝色、有颗粒，核呈深蓝 紫色，偏向钝圆的一端，每一个视野中散布单个、成双或多个虫体。
  根据检验的结果，判定病死兔多种实质脏器中，均存在数量 不等的弓形虫。分离培养无菌操作,取新鲜病死兔的肝脏、脾脏、心血刮取 物和胸腔积液，分别接种于普通琼脂培养基和血清培养基上，置 37 °C温箱中培养24〜48小时后观察，均未见细菌生长。
  回归试验无菌操作，取病死兔的肺、肝、肾等实质脏器病料， 按1 : 10加入灭菌生理盐水后，用组织匀浆搅拌器制成匀浆。将勻 浆冻融3次，用纱布过滤后,注射给2只75日龄的未进行兔出血症 免疫的敏感兔，每只2毫升，并同时滴鼻和点眼各3毫升。
  2只兔分别于36小时和49小时死亡，症状和病变与自然发病兔基本一致。取病死兔肝脏匀浆清液用人类的“0型”红细胞进行血液凝集试 验，结果均为阳性。在病死兔的肝脏、脾脏和胸腔积液的涂片中，均检出弓形虫。
  金清学诊断无菌操作，取6只病死兔的肝、肺和脾脏磨碎， 用灭菌生理盐水制成10%悬液，经每分钟3 000转离心30分钟，取上清液在96孔V型微量滴定板上，按常规法，用人类“O型”红细胞 进行血凝试验，其中3份(3/6)的血凝价为1 : 512,3份(3/6)的血凝价为1 : 256,证明病料中均有大量的兔出血症病毒。
  用已知兔出血症病毒阳性血清，按常规法进行红细胞凝集抑制 试验，结果以上病毒的血凝性，均被该血清抑制，表明病料中的病毒 为兔出血症病毒。小鼠试验无菌操作,取新鲜病死兔的肝脏、肺脏和淋巴结刮 取物，以1 : 5的比例，加入灭菌生理盐水，制成乳剂。
  然后，每毫升 加入青霉素1000IU、链霉素100毫克后，置室温中放置1小时，用前 振荡，待颗粒沉淀后，取上清液接种于小鼠。优选6只健康小鼠，分 为甲、乙两组：甲组每只腹腔接种1毫升乳剂，为试验组；乙组腹 腔注射1毫升灭菌生理盐水为对照组。
  接种后，每天进行观察，第 70小时甲组中有1只发病，6天后,3只全部发病;病鼠食欲消失。腹 部膨大，有大量腹水，最后死亡。对照组无异常变化。采集病鼠的腹水，涂片，染色，镜检发现弓形虫。色素试验(染色试验DT)这是弓形虫病特有的血清学诊断 方法。
  无菌操作，抽取接种试验液72小时以后小鼠的腹水，加灭 菌生理盐水反复离心洗涤2〜3次，制成每毫升含有弓形虫500万个 左右的标准抗原。取病兔的血清，置56 °C水浴中灭能30分钟，用灭 菌生理盐水倍比稀释：1 : 2、1 : 4、1 : 8、1 : 16、1 : 32、1 : 64、 1 : 128。
  将按比例稀释的液体各取0。 1毫升，加人正常人血清0。 2 毫升，再加弓形虫抗原0。 1毫升，置37 °C温箱中作用12小时，取出 待冷，加亚甲蓝染色液2〜4滴，振荡5〜6分钟后取出镜检。判断标准为在400倍下镜检，如50%以上不被染色，为阳性。
  结果大部分1 : 64或1 : 128稀释液为阳性，表明兔已感染弓 形虫。综合检验的结果，新西兰肉兔群发生的疫情，确诊为出血症 和弓形虫混合感染症。收起