如何定性诊断荷斯坦奶牛魏氏梭菌和巴氏杆菌混合感染症？

如何定性诊断牛C型、D型魏氏梭菌和肺炎克雷伯菌混合感染症？

触片镜检无菌操作，采取“猝死症”病死牛的肝、心、脾、肾刮 取物以及取两端结扎、长约30厘米的小肠一段和瘤胃内容物2千 克以上，制肝脏表面触片和切面触片，革兰染色，镜检。结果如下:肝 表面触片，发现革兰阳性大杆菌，切面触片还发现革兰阴性小杆菌。 分离培养无菌操作，取病料少许，分别接种厌氧肉肝 汤、马丁肉汤、普通肉汤和鲜血琼脂平皿，37 °C恒温培养48小时。结果接种肝、脾病料的厌氧肉肝汤培养5〜6小时后，产生大量气体，一致混油。无菌操作，取24小时培养物划线接种于葡萄糖鲜血琼脂平皿， 以焦性没食子酸法，厌氧37 °C培养10〜20小时。 选择可疑菌落划线接种于葡萄糖鲜血琼脂平皿，同时用需...全部

  触片镜检无菌操作，采取“猝死症”病死牛的肝、心、脾、肾刮 取物以及取两端结扎、长约30厘米的小肠一段和瘤胃内容物2千 克以上，制肝脏表面触片和切面触片，革兰染色，镜检。结果如下:肝 表面触片，发现革兰阳性大杆菌，切面触片还发现革兰阴性小杆菌。
  分离培养无菌操作，取病料少许，分别接种厌氧肉肝 汤、马丁肉汤、普通肉汤和鲜血琼脂平皿，37 °C恒温培养48小时。结果接种肝、脾病料的厌氧肉肝汤培养5〜6小时后，产生大量气体，一致混油。无菌操作，取24小时培养物划线接种于葡萄糖鲜血琼脂平皿， 以焦性没食子酸法，厌氧37 °C培养10〜20小时。
  选择可疑菌落划线接种于葡萄糖鲜血琼脂平皿，同时用需氧和厌氧37 °C培养24小时。结果需氧培养的未见可疑菌落生长;厌氧培养的发现菌落生长，菌落稍大，呈淡灰色，圆形，隆起，光滑，边缘整齐，湿润，双重溶血。
  无菌操作，采取菌落，涂片，革兰染色，镜检发现革兰阳性大杆 菌，多单在，也有2〜3个相连。将接种各种培养基平皿的培养物，分别划线接种普通琼脂平皿， 37 °C温箱培养24小时，均发现生长出旺盛、丰厚、乳白色的菌落;涂 片，革兰染色，镜检发现革兰阴性小杆菌，多单在。
  生化反应无菌操作，取革兰阴性小杆菌进行常规生化反应， 结果鉴定为肺炎克雷伯菌肺炎亚种。：革兰阳性大杆菌进行如下常规生化反应，结果分离菌能发酵葡 萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，产酸又产气;石蕊牛乳试验暴烈 发酵，产酸产气，凝固;液化明胶，能产生硫化氢，硝酸盐还原试验阳 性，靛基质试验阴性，卵磷脂酶试验阳性。
  初定为魏氏梭菌。泡沫肝试验无菌操作，采取革兰阳性大杆菌厌氧肉肝汤20 小时培养物，经耳静脉注射于1。5千克以上家兔2只，每只1毫升。 10分钟后，静脉注射2毫升空气以处死家兔，置37 °C培养箱6小时， 发现家兔腹围胀大，剖开腹腔排出大量气体，肠管内充满气体;肝脏 破裂，表面不平，切面呈橡皮泥样变化;取肝脏病料，做成触片，革兰 染色，镜检发现革兰阳性大杆菌。
  致病性试验无菌操作，取革兰阳性大杆菌厌氧肉肝汤20小 时培养物和革兰阴性小杆菌24小时肉汤培养物，经腹腔注射小鼠各 4只，每只0。 2毫升;另经后腿内侧肌肉注射350克豚鼠各4只，每 只0。 5毫升。
  结果经注射培养物的小鼠和豚鼠，均于9〜12小时死 亡。表明毒性很强。人工发病试验无菌操作，取革兰阳性大杆菌厌氧肉肝汤20 小时培养物400毫升于腹部皮下注射20月龄公黄牛1头，于60小 时死亡;公黄牛临死前痛苦挣扎，哞叫；剖解病死牛有如下主要病变： 病死牛鼻镜干燥，包皮积红色液体，血凝不良;注射部位皮下黄色胶 冻样浸润。
  病死牛心肌斑状出血;肺脏水肿，并有不同时期肝变区。 病死牛瘤胃和瓣胃黏膜脱落;小肠内容物呈紫色浆状，黏膜出血、脱落;肠系膜淋巴结切面多汁。病死牛肾脏充血、淤血;膀胱黏膜充血、 出血，尿液呈浓茶色。
  病死牛脾脏不肿，呈斑点状出血。从人工试验的病死牛实质脏器中，回收到攻毒分离菌菌株。肠毒素定型无菌操作，取病死牛小肠内容物适量，经每分钟 3000转离心30分钟，取上清液经尾静脉注射16〜18克小鼠，测得最小致死量为0。
   2〜0。 3毫升。选用某研究所研制的标准魏氏梭菌系列抗毒素，对肠毒素进行小鼠中和试验，定型为C型和D型魏氏梭菌。排毒试验无菌操作，取病死牛脾、肝混合，以磷酸缓冲液 (PBS)按1 : 10研磨经每分钟3 100转离心30分钟。
  取上清液加双抗(青、链霉素每毫升各加2 000IU)，37 °C处理1小时，以0。 22微 米滤膜抽滤。取滤液以每枚0。 2毫升经绒毛尿囊腔接种9胚龄鸡胚 各10枚，37 °C孵育10天，盲传3代。
  结果未能致死鸡胚，排除了病 毒感染。毒物检查取病死牛瘤胃内容物进行磷化锌、氰化物和有机 磷检查，结果全部为阴性;还进行过氟乙酰胺检查，结果也为阴性。综合检验的结果，该县黄牛、水牛群发生的以突然发病、病 程短、死亡率高为主要特征的疫病，确诊为C型和I)型魏氏梭菌和肺炎克雷伯菌肺炎亚种混合感染症。
  收起