TT病毒的检测方法研究是怎样的?
应用PCR技术检测TTVDNATTV在机体内含量较低而变异性高,因此采用PCR法直接检测血清中的TTVDNA是目前诊断TTV感染的主要手段。由于不同基因区碱基序列的保守性大有区别,故应用PCR法检测TTVDNA时,靶区的选择非常重要。 在研究早期,日本学者根据位于翻译区内N22区的基因序列设计引物进行套式PCR扩增法(N22PCR法)检测,发现检出率低,只能检出G1a亚型。后来通过对78例TTV病毒株ORF2区部分基因的序列比较发现,在ORF2区存在一些高度保守的序列,根据这些序列的引物检测TTVDNA,敏感性明显提高,在仅能检测G1型病毒,也能敏感的检测G2型病毒的2个亚型。 而以非...全部
应用PCR技术检测TTVDNATTV在机体内含量较低而变异性高,因此采用PCR法直接检测血清中的TTVDNA是目前诊断TTV感染的主要手段。由于不同基因区碱基序列的保守性大有区别,故应用PCR法检测TTVDNA时,靶区的选择非常重要。
在研究早期,日本学者根据位于翻译区内N22区的基因序列设计引物进行套式PCR扩增法(N22PCR法)检测,发现检出率低,只能检出G1a亚型。后来通过对78例TTV病毒株ORF2区部分基因的序列比较发现,在ORF2区存在一些高度保守的序列,根据这些序列的引物检测TTVDNA,敏感性明显提高,在仅能检测G1型病毒,也能敏感的检测G2型病毒的2个亚型。
而以非翻译区作引物进行PCR检测(UTRPCR法),则可将各种基因型的TTV几乎无遗漏的全部检出,这样,对感染某种基因型TTV的一般健康人群可查出80%以上的阳性率,大大高于用N22PCR法所得的结果。
例如2002年我国学者刘玉兰等人采用UTR及ORF1区二套引物进行PCR检测TTVDNA,结果发现TTV在普通人群及肝病患者中均有很高的感染率,分别为87。6%和94%。URTPCR法的建立是研究中的一个重要进展,使人们对TTV的流行病学特点、传播途径及致病性等方面有了新的了解和认识。
应用ELISA技术检测TTV抗体以原核表达的TTVORF1和/或ORF2蛋白为抗原,应用ELISA技术对血清中的TTV抗体进行检测。方法简便,结果的稳定性和重复性均优于PCR法。适用于大规模血清流行病学调查。
并且依据二抗的不同,还可分别检测IgG和IgM型抗体,用于区分TTV近期感染与既往感染,分析TTV感染后的宿主免疫。这些对研究TTV的致病性将有很大的好处。目前国内外已逐步在开展。收起