何为染色体DNA限制性内切酶图谱分析?
染色体 DNA 限制性内切酶图谱分析(restrcton endonuclease analyss of chromosomal DNA, REA), 染色体 DNA 经高频切割、限制性内切酶消化获得酶切图谱。 不同的 DNA所具有的限制性酶切位点的种类和数目不同,用相同的酶切产生不同大小和数目的 酶切片段,借以区分不同的DNA。同种不同株细菌也可能具有不同的酶切图形,但流行 相关菌株具有相同或相似的图形。 限制片段长度多态性(restrcton frament lenth polymorphsm, RFLP) 即是指限制性内切酶在特定基因组区域切割位点的多样性特点。 REA 分型是一...全部
染色体 DNA 限制性内切酶图谱分析(restrcton endonuclease analyss of chromosomal DNA, REA), 染色体 DNA 经高频切割、限制性内切酶消化获得酶切图谱。
不同的 DNA所具有的限制性酶切位点的种类和数目不同,用相同的酶切产生不同大小和数目的 酶切片段,借以区分不同的DNA。同种不同株细菌也可能具有不同的酶切图形,但流行 相关菌株具有相同或相似的图形。
限制片段长度多态性(restrcton frament lenth polymorphsm, RFLP) 即是指限制性内切酶在特定基因组区域切割位点的多样性特点。 REA 分型是一种快速、:灵敏、分辨力较强的分子分型技术,适合于大规模的流行病学研究,但不足之处是酶切片段较多,图谱解释困难,并容易受质粒DNA污染。
在此基础上,结合 DNA印迹技术(Southern印迹),即将酶切、电泳后的DNA片段转移、固定于支持物上, 与特异探针进行杂交后显示出目的DNA片段可大大简化分析过程義基因特异性探针已用于鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌的分析等。
缺点是RFLP-Southem印迹必须经过滤膜转 移和Southern杂交,费时、费力、周期长。此外,检测视野窄,只能检测那些已知的、改 变限制性内切酶位点序列的DNA变异,RFLP连锁图上还有很多大的空间区,灵敏度不 高,限制了其进一步发展。
核糖体分型(rbotypn) E6j是RFLP-Southern印迹的进一步 发展,专门针对rRNA基因。rRNA基因在大多数原核生物中都具有多个拷贝,其中16S rRNA序列由于大小适中(约1。
5 kb),即能体现不同菌属之间的差异,又能通过测序技术容易得到序列。核糖体分型只有很少的条带,易于解释,但同时也限制了对近缘菌的区 分。较其他方法而言,核糖体分型更适用于确定属及属以上分类单位的亲缘关系。
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