肿瘤干细胞如何分离？
肿瘤干细胞分离方法根据分选原理不同分为表型标记筛选法和侧群细胞（SP）筛选法（1）方法分类：①表型标记筛选法：用荧光标记的表型标记抗体温育细胞，抗体结合到表型标记后，在流式细胞仪荧光活化系统检测下将标有荧光的细胞分选出来。 肿瘤细胞至少具备两种表面标记，一种是成体干细胞或祖细胞的同源或异源表面标记；另一种是以前被广泛报道的与多种肿瘤发生、发展、转移和复发密切相关的细胞表面标记。该方法特异性强，而且能够根据细胞表面标志分子将肿瘤细胞分为多种不同的亚群进行分析。 ②SP法：Goodell等进行造血/祖细胞分析时，发现有一群细胞在流式二维分析点阵图上呈彗星状，分布在干/祖细胞主群的一侧，故称...全部
肿瘤干细胞分离方法根据分选原理不同分为表型标记筛选法和侧群细胞（SP）筛选法（1）方法分类：①表型标记筛选法：用荧光标记的表型标记抗体温育细胞，抗体结合到表型标记后，在流式细胞仪荧光活化系统检测下将标有荧光的细胞分选出来。
肿瘤细胞至少具备两种表面标记，一种是成体干细胞或祖细胞的同源或异源表面标记；另一种是以前被广泛报道的与多种肿瘤发生、发展、转移和复发密切相关的细胞表面标记。该方法特异性强，而且能够根据细胞表面标志分子将肿瘤细胞分为多种不同的亚群进行分析。
②SP法：Goodell等进行造血/祖细胞分析时，发现有一群细胞在流式二维分析点阵图上呈彗星状，分布在干/祖细胞主群的一侧，故称为侧群细胞。该方法中用结合DNA的荧光染料（如Hoechst33342、Rhodamine123）处理细胞，用维拉帕米阻断钙离子依赖转运泵（ABC转运蛋白家族）作为对照组，利用肿瘤干细胞可将染料泵出细胞的性质，经过荧光活化细胞分选系统的分析，将不被染色或低染色的CSC筛选出来。
应用该法研究头颈部CSC发现SP细胞高表达干细胞表面标记【5】。在荧光显微镜下观察SP细胞比流式细胞仪分析更直观，很适合没有明显细胞表面标志的CSC的分选，但存在非特异性。SP细胞代表的干细胞学说面临挑战，Burkert等【6】证实在7种胃肠癌细胞株中存在SP细胞，选择其中的4种癌细胞株进行干细胞生物学行为鉴定，发现分离的SP表型细胞群和非SP表型细胞群在体外克隆形成和体内致瘤能力上无明显差别。
（2）分子基础：①表面标记有两类：一种是正常干细胞/祖细胞的标记：CSC学说认为CSC可能源于正常干细胞的累积突变和/或祖细胞通过基因突变重新获得自我更新能力，CSC可能带有同源正常干细胞/祖细胞的表面标记。
如CD133是一种5-跨膜糖蛋白，存在于正常和初级造血、神经、内皮和上皮系癌细胞膜上的抗原，其显著特点就是随着细胞的分化表达迅速下调，是一个独特的分离和鉴定干细胞和祖细胞的分子标志。目前已经从多种脑肿瘤中分离出肿瘤源性细胞，包括星形细胞瘤、恶性成神经管细胞瘤及胶质母细胞瘤，这种脑肿瘤源性细胞与正常神经干细胞有相同的标记CD133。
研究发现肺癌干细胞存在与支气管肺泡干细胞相似的表面标志物，如Sca-1 ，CD45-，Pecam-，CD34 等。Nanog是全能性和多能性干细胞标志物，其在分化的组织中均表达降低或消失。Ben【7】在乳腺癌、膀胱癌等肿瘤中发现有Nanog的表达，肿瘤级别越高，表达越强，Nanog表达与肿瘤分化状态相关。
AML及CML中的肿瘤干细胞具有与造血干细胞相同的标记CD34 CD38-。另一类CSC标记可能是与肿瘤的发展、转移有关的标记，如CD44属粘附分子家族中的一员，是细胞外基质透明质酸的受体，是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，主要参与细胞与间质之间特异性粘连过程。
Fillmore等【8】发现，在乳腺细胞中，已分化细胞主要表达CD24,而祖细胞群样的细胞则更多表达CD44，并且以CD44 CD24-/low为表型的乳腺细胞表达的基因主要与细胞的能动性及血管生成有关，它们是更为间质的、能动的和雌激素受体阴性的细胞，并且与间质型乳腺癌密切相关。
②功能性标记：ALDH是分选侧群细胞的主要标记。ALDH 细胞在体外克隆形成能力是ALDH-细胞的三倍以上。Jiang等【9】将ALDH用在肺肿瘤干细胞的分选中，并证明ALDH 细胞具有自我更新及多向分化潜能。
ABCG2蛋白是耐药基因ABC转运蛋白家族成员ABCG2/Bcrp1基因产物，ABCG2蛋白表达与SP细胞表征密切相关，推测它除了排出对干细胞有害的毒物，还能排出分化诱导因子，维持干细胞的未分化状态。
因此，ABCG2被认为是干细胞的通用标志物，是从不同组织中分选多潜能干细胞的新途径。费城杰弗森科摩癌症研究中心的研究人员【10】对11号基因组的某个信号片段的功能有了突破性的发现。SAGA是一个至少由20个蛋白组成的不依赖ATP的多功能染色质重塑复合物，它通过对组蛋白H3和H2B氨基末端赖氨酸乙酰化修饰来松动染色质结构，从而促进基因转录的起始。
他们确认了USP22作为hSAGA复合物的一部分，在多种肿瘤中有高表达。USP22号基因编码了一种与癌症有关的、能控制基因表达大幅度变化的酶，这一组基因被称为“癌症干细胞的信号”。
CSC特异性标记已被应用于CSC的分离，但细胞特异性标记的表达与CSC的自我更新和分化特征之间的联系尚不明确，因此特异性标记不能单独用于CSC的分离；分离CSC的标记物分子并不是高度特异的，一种组织CSC标记物不能用于其它组织CSC标记，对CSC特异性标记物有待于进一步深入研究。收起
