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如何分离皮肤表皮细胞和成纤维细胞?

如何分离皮肤表皮细胞和成纤维细胞?

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2016-08-20

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     表皮细胞和成纤维细胞培养中的关键问题是如何分离获得纯 度高的细胞,一般使用的分离方法是消化分离法。所有组织中都_ 含有一定量的细胞间质(基质、纤维等),这些细胞间质可以妨 碍细胞生长,用酶消化后,能除去间质,使组织疏松,细胞相互 分离,易于制备细胞悬液。
  根据组织不同可选用各种不同的酶, 多用胰蛋白酶或胶原酶,也常选用中性蛋白酶。   皮肤表皮细胞和成纤维细胞分离方法:获得皮肤组织后将皮 下组织剔除干净,用眼科剪把组织剪成2〜3mm大小的块,然后 真皮面朝下贴附于培养皿中,将含有胰蛋白酶和中性蛋白酶的消 化液注入培养皿中,4度消化24小时,将皮片取出用Hanks液清 洗后,将表皮和真皮自基底层分离,而后将表皮和真皮分别用含 胶原酶的消化液继续室温或37度消化2~ 3小时,用80目细胞滤 网将细胞悬液过滤,用Hanks反复清洗,将残留于细胞悬液中的 胶原酶洗净,然后通过Fidll进行密度梯度离心,可以获得基本 纯净的表皮细胞或成纤维细胞。
     表皮细胞或成纤维细胞的鉴定:表皮细胞的膜表面有MHC II类抗原的表达,经荧光抗体染色后,可以利用流式细胞技术对 表皮细胞进行检测。成纤维细胞的胞体较大,多呈扁平或梭形, 胞质嗜碱性,胞核较大,椭圆形,染色质疏松着色浅,核仁明 显,利用组织学方法即可对其进行检测。
    。

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