何谓聚合酶链反应(PCR)?
聚合酶链反应或称多聚酶链反应(polymerase chain reaction, PCR),又称无细胞克隆技术(“free bacteria” cloning technique), 是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。 该方 法一改传统分子克隆技术的模式,不通过活细胞,操作简便,在 数小时内可使几个拷贝的模板序列甚至一个DNA分子扩增107〜 108倍,大大提高了 DNA的得率。因此,现已广泛应用到分子 生物学研究的各个领域。
1。 PCR技术的原理PCR是体外酶促合成特异DNA片段 的新方法,主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复 的热循环构成:即在高...全部
聚合酶链反应或称多聚酶链反应(polymerase chain reaction, PCR),又称无细胞克隆技术(“free bacteria” cloning technique), 是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。
该方 法一改传统分子克隆技术的模式,不通过活细胞,操作简便,在 数小时内可使几个拷贝的模板序列甚至一个DNA分子扩增107〜 108倍,大大提高了 DNA的得率。因此,现已广泛应用到分子 生物学研究的各个领域。
1。 PCR技术的原理PCR是体外酶促合成特异DNA片段 的新方法,主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复 的热循环构成:即在高温(95T)下,待扩增的靶DNA双链受 热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温β7〜55t)情况 下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合, 形成部分双链;在Taq酶的最适温度(721)下,以引物3’端 为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’—3’方向延伸, 合成DNA新链。
这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、 退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如 此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的 模板,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷 贝数扩增一倍,PCR产物以2n的指数形式迅速扩增,经过25〜 30个循环后,理论上可使基因扩增109倍以上,实际上一般可 达106〜107倍。
2。 PCR应用领域
(1) 遗传病的产前诊断对于高发的遗传病,如地中海贫血、 镰刀状细胞贫血、凝血因子缺乏、(DMD)等已在临床应用多年。
2。致病病原体的检测其范围包括细菌、病毒、原虫及寄
生虫、真菌、立克次体、衣原体和支原体等一切微生物。
3。 癌基因的检测和诊断虽然对癌基因的研究大部分还属于基 础阶段,但癌变是由基因变异所导致的这一基本事实已毋庸置疑。
4。 DNA指纹、个体识别、亲子关系鉴别及法医物证。
5。 动、植物检疫。
收起