为了显示细胞骨架,选用什么做染色剂较好?
细胞质骨架是由微管(20—25nm)、微丝(5—6nm)和中间纤维(7—11nm) 构成的细胞质内的网状结构,具有支持、运动、物质运输等功能。
用适当浓度的TritonX—100处理细胞,可抽提掉细胞质内结合在膜结构上的蛋白质,而仅保存骨架蛋白。 经戊二醛固定,蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝染色后,就可以在光学显微镜下观察到细胞质骨架的网状结构
操作步骤:
1。撕取洋葱鳞叶内表皮若干片,大小约1cm2,置于青霉素小瓶或小烧杯中。
2。用磷酸缓冲液(PBS)浸泡片刻。
3。吸去磷酸缓冲液,用1% TritonX—100处理20分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质,从而使骨架图像更加清晰。
...全部
细胞质骨架是由微管(20—25nm)、微丝(5—6nm)和中间纤维(7—11nm) 构成的细胞质内的网状结构,具有支持、运动、物质运输等功能。
用适当浓度的TritonX—100处理细胞,可抽提掉细胞质内结合在膜结构上的蛋白质,而仅保存骨架蛋白。
经戊二醛固定,蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝染色后,就可以在光学显微镜下观察到细胞质骨架的网状结构
操作步骤:
1。撕取洋葱鳞叶内表皮若干片,大小约1cm2,置于青霉素小瓶或小烧杯中。
2。用磷酸缓冲液(PBS)浸泡片刻。
3。吸去磷酸缓冲液,用1% TritonX—100处理20分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质,从而使骨架图像更加清晰。
4。吸去TritonX-100,用M—缓冲液洗3次,每次3分钟。
M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。
5。用3%戊二醛固定15—20分钟
6。用PBS洗3次,每次3分钟
7。考马斯亮蓝染色15分钟
8。蒸馏水洗2次
9。置于载玻片上,盖上盖玻片,在光学显微镜下观察。
。收起