凋亡的形态特征和发生机制是什么？
凋亡的细胞形态学变化及其发展过程主要是通过透射电镜和 扫描电镜观察到的。凋亡细胞的核变化发生较早，染色质浓缩， 形成新月体或帽状结构聚集于核膜下，核仁解体为许多嗜锇酸的 细小颗粒；以后核皱缩直至碎裂。 凋亡开始时细胞体积缩小变 圆，细胞表面的特殊结构如微绒毛、细胞连接等减少甚至完全消 失，胞质密度增强，细胞器结构基本保留但呈浓缩状，线粒体结
构无显著变化，有的内质网扩张并与细胞膜融合。稍后细胞显著 变形，胞体部分向外膨出形成大囊泡，成为特征性的“发泡现 象”，部分则呈“痉挛”样收缩，同时质膜卷曲内摺，包绕胞浆 基质、细胞器和核碎片，最终整个细胞进一步崩解成为互相分离 的大小不等的有质膜...全部
凋亡的细胞形态学变化及其发展过程主要是通过透射电镜和 扫描电镜观察到的。凋亡细胞的核变化发生较早，染色质浓缩， 形成新月体或帽状结构聚集于核膜下，核仁解体为许多嗜锇酸的 细小颗粒；以后核皱缩直至碎裂。
凋亡开始时细胞体积缩小变 圆，细胞表面的特殊结构如微绒毛、细胞连接等减少甚至完全消 失，胞质密度增强，细胞器结构基本保留但呈浓缩状，线粒体结
构无显著变化，有的内质网扩张并与细胞膜融合。稍后细胞显著 变形，胞体部分向外膨出形成大囊泡，成为特征性的“发泡现 象”，部分则呈“痉挛”样收缩，同时质膜卷曲内摺，包绕胞浆 基质、细胞器和核碎片，最终整个细胞进一步崩解成为互相分离 的大小不等的有质膜围绕的凋亡小体（图01)。
有的凋亡小体内 包有核物质，有的只含有胞质成分，其中细胞器质膜仍保存。组 织内凋亡小体形成后很快被邻近的巨噬细胞及其它固有的细胞 (如上皮细胞，甚至肿瘤细胞）识别、吞噬和消化。体外细胞培 养中凋亡细胞的结局与在体内组织中不同，因无巨噬细胞的吞 噬，凋亡小体可被其他死亡细胞所释放的溶酶体酶溶解，类似细 胞坏死的后期变化。
有关凋亡发生机制，在20世纪80年代初发现凋亡细胞内的 DNA内切酶激活，后者将核双股DNA在核小体连接区切割成180
~2G0bp (即核小体DNA长度）整倍数的大小不一片段，电泳时 呈现阶梯状条带。
一度曾认为这是凋亡的特征和关键机制，但 90年代以来的研究表明细胞凋亡的机制远较此为复杂，有许多 至今未知的细节。一般认为细胞接受到某种（些）凋亡信号后， 启动细胞内一系列基因（称凋亡相关基因，其中包括一些癌基因 和抑癌基因，如8€1-2家族、〇-111^、1)53等），表达产生多种 蛋白酶、蛋白激酶、受体蛋白等，其中有的分子参与凋亡信号传 递，有的对凋亡的进程起到正或负调节作用，还有的是执行凋亡 的效应分子。
但迄今对于细胞内分子水平的变化与凋亡细胞的一 系列细胞水平的变化（如染色质的凝聚、细胞骨架的解聚或重 组、巨噬细胞对凋亡小体的识别和吞噬等）之间的联系还不很清 楚，尚在研究中。
目前病理学对细胞凋亡的检测常用以下几种方法。
①一般光 镜观察：HE染色的组织切片中凋亡细胞很难确认，低倍镜下易 误认为分叶核白细胞或核碎裂的坏死细胞。树脂包埋的组织薄切 片在高倍镜下可以分辨其中典型形态的凋亡细胞。但是据研究， 细胞凋亡过程短暂，从最初出现核染色质变化到凋亡小体的形成 可短至只需数分钟，凋亡小体形成后至被吞噬消化大约也只需数 小时，所以在组织切片中能看到的凋亡细胞数量实际是很少的， 难以作定量分析；②超薄切片电镜观察：如上已述，凋亡细胞具 有一定的超微结构特征，电镜技术可以较准确地判定单个的凋亡 细胞，但由于视野所限，无法对组织中凋亡发生的总体情况进行 检测和分析；③TUNEL法：TUNEL的全称是1虹-11^(^6(1- dUTP nick end labeling,即末端脱氧核苷酸转移酶（TdT)介导的 dUTP缺口末端标记法。
此方法是基于认为凋亡细胞的特征是细 胞内有许多在核小体连结处被切断的DNA片段，其3' - OH末端 可在TdT介导下与试剂中已标记的脱氧核苷酸（常用为dUTP) 结合，通过标记物（常用荧光素FITC、地高辛/辣根过氧化物酶 或碱性磷酸酶）的显示来识辨凋亡细胞。
由于此方法可用于石蜡 包埋标本，可显示常规切片上不能确定的凋亡细胞，且在组织中
原位显示，易于识别凋亡细胞的性质，是当前流行使用的一种方 法，但现有不少人对其特异性提出疑问。坏死晚期由于内源性核 酸内切酶和蛋白酶的作用，DNA被切割成大小不等的片段，也 可能出现TUNEL标记阳性；而细胞出现典型凋亡的形态改变时， 也可不伴有核小体间的DNA降解，因此宜将TUNEL标记与细胞 形态特点结合进行判断；④免疫组化法：已知某些凋亡相关基因 编码的蛋白如Fas、Bel - 2与凋亡的关系较密切。
此技术为病理 医生所熟悉，并有市售的抗体，但其特异性及敏感性有待确定； ⑤核酸凝胶电泳法：此技术显示的阶梯形条带在一段时间内被认 为是判断凋亡最可靠的标准，但近年来对此已有异议。此外，这 种方法可用于培养细胞而不适用于组织标本，故此处不赘述。
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