石房蛤毒素化学仪器分析法如何检测
在20世纪80年代,许多研究机构使用诸如X射线衍射、薄层色谱-荧光检测、高速液相色谱(HSLC)等方法发现了新的化合物。1975年,Shimizu等第一次描述了gTX1、GTX2、和gTX3的存在。 使用葡聚糖凝胶g或生物胶P-2聚丙烯酰胺凝胶柱,通过稀乙酸洗脱,从gTX成分里分离出了STX,然后使用HSLC将gTX的峰值分解成三种不同的毒素。1987年,Oshima和他的合作者开发了一种后置柱氧化法,该方法可以详细地分析天然甲藻、水华、贻贝、牡蛎等抽提物中所含的PSTs。 与Oshima的后置柱氧化法相反,Lawrence等研制了使用前置柱氧化的液相色谱法,来产生带荧光的PSTs衍生...全部
在20世纪80年代,许多研究机构使用诸如X射线衍射、薄层色谱-荧光检测、高速液相色谱(HSLC)等方法发现了新的化合物。1975年,Shimizu等第一次描述了gTX1、GTX2、和gTX3的存在。
使用葡聚糖凝胶g或生物胶P-2聚丙烯酰胺凝胶柱,通过稀乙酸洗脱,从gTX成分里分离出了STX,然后使用HSLC将gTX的峰值分解成三种不同的毒素。1987年,Oshima和他的合作者开发了一种后置柱氧化法,该方法可以详细地分析天然甲藻、水华、贻贝、牡蛎等抽提物中所含的PSTs。
与Oshima的后置柱氧化法相反,Lawrence等研制了使用前置柱氧化的液相色谱法,来产生带荧光的PSTs衍生物。他们证明,使用过氧化氢氧化对分析非羟基化毒素的敏感性更强,而高碘酸盐氧化作用对分析羟基化毒素的敏感性更强。
在这一时期,他们改进了这种技术,例如向高碘酸盐氧化剂中添加了铵甲酸盐,从而改善了neoSTX、GTX1、B2和C3的分析结果,而且由于添加了这种化合物到流动相,使neoSTX和B2的色谱分析更好。
由于在检测过程中,pH对检测结果的影响很大,研究人员在检测过程中对pH进行了控制。Gago-Martinez等使用前置柱方法时,分别将高碘酸盐和过氧化物氧化过程的pH调节到7。2-12和8。2-12。
8,最后得到的荧光氧化产物的产量不同。当pH在8。2时,通过高碘酸盐氧化作用neoSTX的产量达到了最大,而pH在10-11。5时,STX、GTX2/3、dcSTX和gTX5的产量也都达到了最大。
Lawrence等声明采用柱前氧化pH很容易控制,因此结果的可重复性更强,因为在后置柱氧化时pH变化很小,相应对标记上荧光的产物的产量影响很小。然而,尽管柱前方法相对比较简单,但是一些PSTs形成了相同的氧化产物,另外一些形成了不只一种荧光产物。
这种方法被建议作为一种筛选方法来为监测程序服务。最初的提议是首先使用高碘酸盐氧化方法,当检测出大多数PSTs,并且毒素浓度超过常规检测限80μg STXeq/100g时,接着采用过氧化氢氧化。
色谱氧化法已经用于检测贝类中的毒素,研究PSTs在不同地区鼠脑的分布,他们认为这种方法很合适,敏感度也很高,因此该方法已被欧洲国家确定为检测PSTs的官方检测方法之一。然而,Ben-Gigirey等进行了实验室研究,推断尽管该方法适合于检测研究,但对含有更复杂毒素的样品进行分析时,得到的结果不理想,并且也不是对所有的PSTs都有效。
此外,该法只是针对STX、GTX2/3、dcSTX、dcGTX2/3等毒素类似物,可以得到满意的检测结果。Turner等使用该标准对Lawrence的方法进行了进一步的验证,主要包括其选择性、线性、检测限、准确性、回收率、精确度、可重复性、适用性,同时也包括添加dcNeoSTX、dcGTX2/3等PSTs。
Turner等对该方法进行了改进,以增加氧化产物的稳定性,改善了固相离子交换的纯度,最终推断该方法可以得到满意的结果。收起