菌种的分离培养是怎么回事？
分离材料的选择与采集。①子实体。在晚秋季节，潮湿多雨的地区，有大量蜜环 菌子实体长出土面，采集新鲜、形态完整、生长健壮、无病虫 为害的子实体作为分离材料。可用子实体的组织或孢子进行分 离，用作孢子分离的子实体，应选择较成熟、正在释放孢子的 子实体。 ②天麻块茎。9、10月份新生麻将要进人休眠期，部分箭 麻和白麻表面感染了蜜环菌索，选择带有红色菌索的块茎进行 分离。在正常情况下，蜜环菌索只能侵人新生麻表皮细胞，附 着在表面，因此应选择有蜜环菌索的部位，切取天麻表层细胞 进行组织分离。 白麻栽种后生长出新生麻，如果新生麻已接蜜 环菌，说明该蜜环菌与天麻具有良好的亲和性，此材料为最好 的分离...全部
分离材料的选择与采集。①子实体。在晚秋季节，潮湿多雨的地区，有大量蜜环 菌子实体长出土面，采集新鲜、形态完整、生长健壮、无病虫 为害的子实体作为分离材料。可用子实体的组织或孢子进行分 离，用作孢子分离的子实体，应选择较成熟、正在释放孢子的 子实体。
②天麻块茎。9、10月份新生麻将要进人休眠期，部分箭 麻和白麻表面感染了蜜环菌索，选择带有红色菌索的块茎进行 分离。在正常情况下，蜜环菌索只能侵人新生麻表皮细胞，附 着在表面，因此应选择有蜜环菌索的部位，切取天麻表层细胞 进行组织分离。
白麻栽种后生长出新生麻，如果新生麻已接蜜 环菌，说明该蜜环菌与天麻具有良好的亲和性，此材料为最好 的分离材料，如果新生麻细长，母麻体表无蜜环菌索侵染，说 明母麻未和蜜环菌建立共生关系，不宜作为分离材料。
③菌索。蜜环菌在自然界中主要以菌索的形式分布生长 在多种树木的根部及枯树根上，也有一少部分寄生在活树根上。幼嫩的菌索棕红色，具有白色生长点，剥去外壳，内部充 满白色疏松菌丝，靠近白色生长点的幼嫩部位，菌丝再生力和 生活力都很强，为最好的分离材料。
在野外采挖野生蜜环菌菌 索时，不宜与树根、树桩分开。为了提高分离成功率，可将附 着菌索的树根埋入潮湿的沙土中，浇水保湿，在适宜条件下， 发出新菌索后，采摘白色生长点及红色幼嫩的菌索进行分离， 提高分离的成功率。
老化的菌索呈黑色和黑褐色，鞘内菌丝为 黄色，干枯状，有的成空壳，不适宜作分离材料。(2)分离方法和技术。①组织分离。是利用蜜环菌子实体、菌索及带菌索的天 麻块茎进行分离而获得蜜环菌菌种的方法。
这种方法分离得到 的蜜环菌菌种生命力强，菌丝生长快，得到的菌种纯，因此， 该种分离技术应用较广。具体方法是：选择品质优良，处于生长旺盛的蜜环菌子 实体，先用清水洗净黏附的泥土、杂物，放于接种室中的无菌 器皿中，用表面消毒剂（如75%酒精，0。
1%升汞溶液）浸泡 0。5〜1分钟，取出样品用无菌水冲洗数次，去掉残留消毒液。 用灭菌滤纸吸去黏附的水分，用无菌刀将子实体的菌盖截取 0。5平方厘米的小块，用无菌镊子将其移植在PDA平板培养基 上即可。
在25丈恒温条件下培养7〜10天就可见有少量菌丝 和棕红色的菌索出现。将菌索及带菌索的天麻块茎先用清水洗净黏附的泥土， 然后切取所需要的部分组织，用75%酒精、0。1%升汞溶液分 别浸泡0。5〜1分钟，无菌水冲洗数次，去掉残留消毒液，置 于无菌培养皿中。
将菌索或天麻块茎组织剪成小段或小块，放在青霉素溶液中浸片刻，用灭菌滤纸吸去黏附的水分，将组织 块置于预先准备好的平板培养基上。每皿3〜4块。在25T 恒温条件下培养3天左右，在接种点处开始发出少许绒毛状白 色菌丝，很快转为白粉色，7天以后开始长出菌索。
②孢子分离。利用子实体成熟后散出的孢子在适宜的培 养基上萌发，长成菌丝而获得纯菌种的方法。用75%的酒精对菌盖表面及菌柄部分进行消毒，消毒后 菌褶朝下插在孢子收集装置的支持架上。将支持架放在无菌培 养皿中，然后用大烧杯罩住以收集孢子。
所有采集装置和用具 需先灭菌，操作时需要在无菌条件下进行，以保证收集孢子的 纯洁度。待孢子落入培养皿内，用无菌水制成孢子悬浮液，经 过逐级稀释后使孢子充分散开，再用无菌吸管吸取后接种在 PDA平板培养基上。
在25T恒温条件下培养3天左右，开始 发出少许白色菌丝体，挑取培养皿内的菌丝移置在斜面培养基 上，继续培养数日即可发出菌索。3菌种纯化在平板培养基上最初分离出的菌种，经过选择后再进行 纯化培养以得到质量优良的纯菌种。
菌种的纯化工作也是在无 菌条件下进行，当萌发出菌丝在平板培养基上刚产生菌索分枝 时，立即用接种伊选择其中生长势旺盛而幼嫩的菌索部分，截 取2〜3毫米一小段菌索，移入试管斜面培养基中央处。在 25T恒温条件下培养，待菌索长满培养基后即为纯化的母种。
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