化学沉淀的基本原理是什么？

变性沉淀法的原理是什么？

选择性沉淀法的原理是利用蛋白质对某些物理或化学因素敏感性的不同，而有选择地使之变性沉淀，达到分离提纯的目的。不同蛋白质在不同的条件下有不同的稳定性，改变温度、pH或加入有机溶剂，许多杂蛋白发生变性沉淀，而目的蛋白不形成沉淀，就可以分离出比较纯的目的蛋白。 选择性沉淀法选择性沉淀法的原理选择性沉淀法的原理是利用蛋白质对某些物理或化学因素敏感性的不同，而有选择地使之变性沉淀，达到分离提纯的目的。不同蛋白质在不同的条件下有不同的稳定性，改变温度、pH或加入有机溶剂，许多杂蛋白发生变性沉淀，而目的蛋白不形成沉淀，就可以分离出比较纯的目的蛋白。 利用对热的稳定性不同，加热破坏某些蛋白，而保留目的...全部

  选择性沉淀法的原理是利用蛋白质对某些物理或化学因素敏感性的不同，而有选择地使之变性沉淀，达到分离提纯的目的。不同蛋白质在不同的条件下有不同的稳定性，改变温度、pH或加入有机溶剂，许多杂蛋白发生变性沉淀，而目的蛋白不形成沉淀，就可以分离出比较纯的目的蛋白。
  选择性沉淀法选择性沉淀法的原理选择性沉淀法的原理是利用蛋白质对某些物理或化学因素敏感性的不同，而有选择地使之变性沉淀，达到分离提纯的目的。不同蛋白质在不同的条件下有不同的稳定性，改变温度、pH或加入有机溶剂，许多杂蛋白发生变性沉淀，而目的蛋白不形成沉淀，就可以分离出比较纯的目的蛋白。
  利用对热的稳定性不同，加热破坏某些蛋白，而保留目的蛋白，可以达到除去杂蛋白的目的。比如利用杂蛋白在不同温度下产生沉淀，将样品溶液升温至45～65℃，保温一定时间，使杂蛋白形成最大程度的沉淀，同时，目的蛋白的活性损失最少。
  由于不少蛋白酶在此温度范围内比较稳定，为了避免样品中发生酶解而造成目的蛋白的活性损失，操作前可适当加入蛋白酶抑制剂。利用酸碱变性有选择地除去杂蛋白，很多蛋白质在pH 5。0或以下被沉淀，只有少数蛋白质在中性或碱性条件下形成沉淀。
  如果目的蛋白在此pH范围内能够保持稳定，就可以通过调节pH来除去杂蛋白。这样的例子很多，比如用2．5%的三氯乙酸处理胰蛋白酶、抑肽酶或细胞色素C粗提液，均可除去大量杂蛋白，而对所提取的酶活性没有影响。
  该方法还适用于初步纯化原核微生物表达的重组蛋白质，因为很多细菌蛋白质的等电点在pH5。0左右，通过调节pH至其等电点一可以先除去这部分蛋白质。调节pH时，常用醋酸、柠檬酸或碳酸钠，也可采用高氯酸、三氯醋酸等强酸，但是需要注意安全。
  加入10%的三氯醋酸可以沉淀大部分的蛋白质，20%的三氯醋酸可以沉淀分子量低予20000的蛋白质，操作时需在冰水浴中进行。选择性沉淀法选择性沉淀法举例以盐析法选择性沉淀蛋白质为例简述沉淀步骤。
  蛋白质盐析常用中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠等。其中应用最广的是硫酸铵，其优点是温度系数小而溶解度大(25℃时饱和溶解度为4。1mol/L，即541g/L；0℃时饱和溶解度为3。
  9mol/L，即515g/L)，在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来，而且硫酸铵价廉易得，分段效果比其他盐好，不容易引起蛋白质变性。在建立沉淀蛋白质的最初盐析方案时，硫酸铵是最好的选择。
  盐析就是从没有颗粒物的含有蛋白质混合物溶液开始，使用分步盐析的方法将粗混合物分级分离成两个部分，只有一个部分含有目的蛋白。选择性沉淀法材料适当pH的缓冲液、硫酸铵、澄清的粗蛋白溶液。选择性沉淀法方法1 将蛋白质样品对缓冲液或缓冲液/硫酸铵混合液透析，硫酸盐的浓度要低于使蛋白质开始沉淀所需的盐浓度；2 进行一个预试验来确定蛋白质浓度、pH、盐浓度、温度和温育时间，在小试管中放入一系列的小份样品，在开始的试验中使用大的步级(如1～2个pH单位，或5～10倍的盐浓度差异)，在后续的试验中可以将步级变窄；3 用量筒测量要浓缩的蛋白质的体积，然后倒入适当容积的烧杯中，烧杯置于冰浴中；4 在硫酸铵表中，查找产生20%饱和度所需的固体硫酸铵的量，称量出所需的硫酸铵，研磨成光滑的粉末；5 在冷室中将装有预冷的蛋自质溶液的烧杯放在一个搅拌器上，然后缓慢加入固体硫酸铵，让混合物搅拌60min以确保沉淀完全；6 将混合物转移至离心管中，平衡后于4℃，10000g离心15min7 轻轻倒出上清液，将蛋白质颗粒(占0～20%组分)及上清液(含有仍溶解于20%硫酸铵的蛋白质)保存好；8 将上清液放回冷室，缓慢地往上清液中加入硫酸铵至30%的浓度，让混合物搅拌60min以保证沉淀完全；9 将溶液转移至离心管中，平衡后于4℃，10000g离心15min。
  10 轻轻倒出上清液，将蛋白质颗粒(占20%～30%组分)及上清液保存好；11 重复步骤6～8，添加硫酸铵至浓度为40%，50%，最后达到80%饱和度，在增加硫酸铵浓度前，离心除去沉淀的蛋白质。
  12 在缓冲液中重悬回收的蛋白质沉淀(0～20%，20%～30%，30%～40%，…)，用SDS-PAGE和快速Western印迹分析来分析这些蛋白质沉淀以及最终上清液中的目的蛋白和总蛋白。收起