概述己烯雌酚油剂照高效液相色谱法(附录ⅤD)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-
水(75:25)为流动相;检测波长为254nm。
取己烯雌酚对照品约10mg,加氯仿50ml使溶解,在暗处放置不少于5小时,量取5。 0ml,挥干氯仿,残渣(已烯雌酚的顺式体和反式体)加乙醇-水(1:1)25ml使溶解,取10μl注入液相色谱仪,记录色谱图,已烯雌酚反式体峰与顺式体峰的相对保留时间分别为1:1。
33。理论板数按已烯雌酚反式体峰计算应不低于1000,己烯雌酚反式体峰与顺式体峰的分离度应大于3。 0。测定法取己烯雌酚对照品适量,精密称定,加乙醇-水(1:1)溶解并稀释制成每1ml中约含0。
1mg的溶液,精密量取10μl注入液相色谱仪,记录色谱图;另取本品适量,同法测定,按外标法以已烯雌酚反式体峰面积和顺式体峰面积的总和(已烯雌酚顺式体峰的面积与1。26相乘)计算,即得。 测定方法方法名称己烯雌酚原料药-己烯雌酚-高效液相色谱法应用范围本方法采用高效液相色谱法测定己烯雌酚原料药中己烯雌酚的含量。
本方法适用于己烯雌酚原料药。方法原理供试品经乙醇-水(1:1)溶解并定量稀释,进入高效液相色谱仪进行色谱分离,用紫外吸收检测器,于波长254nm处检测己烯雌酚的峰面积,计算出其含量。 试剂1。
甲醇2。乙醇仪器设备1。仪器1。1高效液相色谱仪1。2色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,理论塔板数按己烯雌酚反式体峰计算应不低于1000,己烯雌酚反式体峰与顺式体峰的分离度应大于5。0。1。
3紫外吸收检测器2。色谱条件2。1流动相:甲醇/水=80/202。 2检测波长:254nm2。3柱温:室温试样制备1。对照品溶液的制备精密称取己烯雌酚对照品适量,加乙醇-水(1:1)溶解并定量稀释制成每1mL中约含己烯雌酚0。
1mg的溶液,即为对照品溶液。2。供试品溶液的制备精密称取供试品适量,加乙醇-水(1:1)溶解并定量稀释制成每1mL中约含己烯雌酚0。 1mg的溶液,即为供试品溶液。注:“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。
“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。操作步骤:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,用紫外吸收检测器于波长254nm处测定,按外标法以己烯雌酚顺式体峰面积的1。
26倍与己烯雌酚反式体峰面积的和计算出含量。参考文献:中华人民共和国药典,国家药典委员会编,中国医药科技出版社,2010版,二部,p。39。