PCR污染分析及对策是什么？

rt-pcr产物做测序结果有双峰

要看你出现的双峰是个别碱基还是所有碱基，如果是个别碱基，那么也有可能是基因多态性，可能还有重大发现呢。如果是测序结果开始没有问题，后面出现问题，有可能是测序本身的问题，再试试看。如果所有位置都有双峰，那问题比较倾向于实验本身的问题，还要看你实验目的是什么：如果RT-PCR结果是用来分析基因的表达，那么两种不同片段都被计算在表达量上了，因此就彻底没有什么用了，重新开始吧。 如果你是想克隆一个基因或者一个基因片段，那么没有关系，把RT-PCR扩增的片断纯化后装到任何一个载体里面，转化大肠杆菌，获得阳性克隆。按照概率，其中一部分应该是你需要的目的基因，酶切后进行测序鉴定，找出你需要的克隆就可以...全部

  要看你出现的双峰是个别碱基还是所有碱基，如果是个别碱基，那么也有可能是基因多态性，可能还有重大发现呢。如果是测序结果开始没有问题，后面出现问题，有可能是测序本身的问题，再试试看。如果所有位置都有双峰，那问题比较倾向于实验本身的问题，还要看你实验目的是什么：如果RT-PCR结果是用来分析基因的表达，那么两种不同片段都被计算在表达量上了，因此就彻底没有什么用了，重新开始吧。
  如果你是想克隆一个基因或者一个基因片段，那么没有关系，把RT-PCR扩增的片断纯化后装到任何一个载体里面，转化大肠杆菌，获得阳性克隆。按照概率，其中一部分应该是你需要的目的基因，酶切后进行测序鉴定，找出你需要的克隆就可以了。
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