硫酸软骨素含量测定的计算公式
有谁知道硫酸软骨素含量测定的计算公式：【含量测定】 对照品溶液的制备 精密称取经105℃干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品0。1g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。每1 ml中含盐酸氨基葡萄糖0。
1mg。供试品溶液的制备 取本品约0。15g ，精密称定，置50ml量瓶中，加6moI/L盐酸溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置50ml量瓶中，加塞, 置水浴中加热2小时，取出，放热至室温，用氢氧化钠溶液（1→5）中和至中性，加水至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，除去初滤液，保留续滤液备用。
测定法 精密量取对照品溶液与供试品溶液各1ml，各取两份，分别置4支具塞试管中，加水至5 ml；另取具塞试管1支，加水5 ml 作为空白，各加乙酰丙酮试液（取乙酰丙酮2 ml，加0。1moI/L碳酸钠溶液至50 ml，置冰箱中备用，应于使用前一日配制）1 ml，摇匀，置水浴中，准确加热25分钟，取出，用冰水迅速冷却后，加无醛乙醇3 ml，在60℃水浴中保分钟后，再加对二甲氨基苯甲醛试液（取对二甲氨基苯甲醛0。
8g，加无醛乙醇15 ml及盐酸15ml，摇匀）1 ml ，强力振摇，并继续在60℃水浴中保温1小时，立即用冷水冷却至室温，照分光光度法（《SOP09-405-00紫外分光光度操作规程》）,在525nm的波长处分别测定对照品溶液与供试品溶液的吸收度，以两份的平均值，计算，乘以0。
8309即为供试品中氨基葡萄糖的量。。
全部回答
（一） 重量法
根据样品中分离出的单质或化合物的重量测定所含成分的含量。根据被测组分分离方法的不同，可分为提取法、挥发法、沉淀法。
1．提取法用适宜的溶剂提取出样品中的某种成分，再蒸去溶剂进行测定。
例如胰酶中脂肪含量测定是用乙醚提取后挥散乙醚，残渣在105℃干燥2hr称重并计算。 2．挥发法是利用被测组分具有挥发性，或将它转化为挥发性物质来进行含量测定的方法。“炽灼残渣”为直接挥发法的一种特殊方式：“干燥失重”为间接挥发法。
3．沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化成难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，然后经过滤、洗涤、烘干或炽灼，最后称重并计算其含量的方法。 根据样品中某些成分与标准溶液能定量地发生酸碱中和、氧化还原或络合反应等进行测定。
如胰酶的淀粉酶测定是利用氧化还原反应，以淀粉为底物，经淀粉酶水解后产生还原糖，在碱性溶液中还原糖又将斐林试剂中的CUZ＋还原成Cu＋，多余的Cu＋在酸性溶液中与KI作用析出碘，然后用硫代硫酸纳滴定所析出的碘，来推算糖的含量，进而标定淀粉酶的效价。
又如L盐酸精氨酸是用电位滴定法测定含量的。 （三）比色法 医学。全。在。线网站 样品与显色剂可发生颜色反应，依颜色反应的强度测定含量。如蛋白质的含量测定，可利用蛋白质与双缩脲试剂发生颜色反应，而进行定量测定。
硫酸软骨素的含量也是用比色法测定的，具体介绍如下。 本品系自猪的喉骨、鼻中骨、气管等软骨组织提取制得的酸性粘多糖。 按干燥品计算，含氨基己糖以氨基葡萄糖计算，应不得少于24．0％。
本品采用Elson-Morgan色法测定含量，其基本原理为样品先用盐酸水解生成氨基己糖，然后在碱性条件下与乙酰丙酮反应，生成色原物质，再与对二甲氨基苯甲醛反应产生红色，以盐酸氨基葡萄糖为对照品，用比色法测定。
对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖0。1g，置l00ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置l00ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。
每1ml中含盐酸氨基葡萄糖0。1mg。 供试品溶液的制备取本品约0．15g，精密称定，置50ml量瓶中，加6mol／L盐酸液使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取5rrll置5Oml量瓶中，密塞，置水浴中水解2h，取出放冷，用氢氧化钠溶液（1→5）中和至中性，加水至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，弃取初滤液，保留续滤液备用。
测定法精密量取对照品与供试品溶液各1ml，各取2份，分别置4支具塞试管中，各加水至5ml；另取具塞试管一支，加水5ml作为空白，各加乙酰丙酮试液 1ml，摇匀，置水浴中（1ml后密塞），准确加热25min，取出，用冰水迅速冷却后，加无醛乙醇3m1，在6O℃水浴中保温10min后，再加对二甲氨基苯甲醛试液1ml，强力振摇，并继续在60℃水浴中保温1h，立即用冷水冷却至室温，照分光光度法，在525nm的波长处分别测定对照品溶液与供试品溶液的吸收度，以两份的平均值，按下式计算： （计算公式） 式中互为供试品溶液吸收度的平均值，s为对照品溶液吸收度的平均值，Ws为对照品溶液每lml中含盐酸氨基葡萄糖的量（mg），W为供试品重量（mg）， 0。
8309为氨基葡萄糖与盐酸氨基葡萄糖分子量的比值。本法专属性强，操作简便、结果稳定。值得注意的是实验中所用乙醇必须是无醛乙醇。否则，将影响测定结果的准确性。 （四）紫外分光光度法 样品或转化后的产物在某一波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，其浓度与吸收度成正比，则可进行定量测定。
如蛋白质在280nm左右有最大吸收，胰蛋白酶与底物N－乙酰－L酪氨酸乙酯作用后的产物在237nm处有最大吸收，根据其吸收度可进行定量。 （五）高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）法的种类很多，应用也十分广泛，现将生化药物中常用的方法概述如下。
1．反相高效液相色谱法（RP－HPLC）以（C4、C8、C18）烷基硅烷键合相为柱填料，以甲醇-水、乙腈-水或甲醇、乙腈与缓冲液构成的溶液为流动相，以紫外、荧光或电化学检测器为检测手段，这种色谱体系在生化药物（例如肽类、氨基酸、蛋白质、多糖等）定量分析中应用广泛。
例如：生白能（leucomax）的含量测定就是采用RP－HPLC法。 本品系基因工程药物。它的活性成分为重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（γHUGM·CSF），是一种调节造血和白细胞功能所必须的蛋白质。
含量测定方法如下。 磷酸缓冲液的配制：称取Na2HPO43。 55g，加水400ml，溶解后用稀磷酸调pH至7。0，加水至500ml，摇匀。 供试品及对照晶溶液的配制：精密称取供试品或对照品适量，用上述磷酸盐缓冲液配制成300μg／ml的溶液即可。
仪器与色谱条件：岛津HPLC仪（LC10A）。色谱柱规格为15cm×4．6mm，柱填料为TSK ODS120T（5μm）柱温：室温；检测波长：214nmz流动相：A液为0．1％三氟乙酸水溶液，B液为乙腈－1％三氟乙酸水溶液（90：10）；梯度洗脱： （表） 流速：1。
0ml／min。在上述条件下依次注入对照品、样品溶液各20μl作HPLC分析，其色谱图见图。 计算方法按峰面积外标法计算。本品含量应为标示量的85。0～110。0％。
本法准确度高（回收率大于98％），精密度好（RSD小于2％）。tR21。236min的峰为生白能的主成分，tR13。 639min的峰为人血白蛋白（生白能的添加剂），主成分与添加剂的分离度R＞2。
0。 本法采用梯度洗脱，使主成分与添加剂的分离十分完全。流动相中加入三氟乙酸，增大了对蛋白质的洗脱力，且使主成分峰形尖锐、对称。 2．高效离子交换色谱法（HPIEC） HPIEC是蛋白质、多肽分离分析中常见的方法之一。
HPIEC具有以下特点： 1）蛋白质、多肽的分离是根据其相应的离子化程度而进行的。暴露在外的带电荷的氨基酸残端的数量（如天冬氨酸、赖氨酸）将影响洗脱过程。 2）分离过程是以盐浓度增大的梯度洗脱法进行的。
样品液必须和进样前的流动相保持相同的pH和离子强度。为获得良好的重现性，样品进样前，柱必须充分平衡。 典型的分离梯度是缓冲液为0。3～1。0mol／L的盐溶液。如有可能应尽量避免使用卤素类盐以延长不锈钢柱的寿命。
3）柱效中等并具有较高质量的活性回收。虽然获得的峰比反相色谱更宽，但活性回收更佳。活性蛋白质的回收可通过不同强弱交换类型的选择而优化。对于一些敏感蛋白质，如果回收有问题，弱型离子交换剂可获得更好的活性和质量回收。
医学。全在。线 （3）高效凝胶过滤色谱法（HPGFC） HPGFC可用于多肽和蛋白质等生化药物的分离及其分子量的测定。HPGFC柱上填充着微粒状的具有亲水性表面组成的有机物载体或表面性质得到改造的硅胶类物质。
HPGFC有如下优点： 1）活性蛋白质可得以回收。 填料和样品间的相互作用在所有的液相色谱技术中，本法是最温和的。因此，活性蛋白质几乎可以全部回收，除非流动相中含有变性剂，如尿素等。
2）分离是在固定比例的水溶液中进行的。流动相通常为缓冲液。为了提高分离能力，可加入少量的能与水互溶的有机改性剂或表面活性剂。 3）分离是根据蛋白质．或多肽在溶液中相应的有效粒径而进行的。
当蛋白质具有相同的形状（如球状或纤维状）时，通常可以根据分子量来预示组分的洗脱顺序，故可用来测定蛋白类药物的分子量。 例如：用HPGFC法测定重组人肿瘤坏死因子（rh－TNF）衍生物的分子量，现介绍如下。
rh-TNF属基因工程药物，其分子量的测定是该药质量控制的主要指标之一。 仪器与色谱条件：岛津LC－10A HPLC仪；色谱柱：Beckman Ultraspherogel SEC3000（30cm×7。
5mm）柱；流动相为0。1mmol／L KH2P04：0。1mmol／L Na2S041：1）＋0。05％叠氮化钠，流速1ml／min；检测波长为280nm。 标准蛋白分子量曲线的制备选用四种蛋白：醛缩酶、血清白蛋白、碳酸酐酶及抑蛋白酶肽制成混合标样。
考虑到流速等因素对保留时间T的影响而选用了内标法，即在混合标样中加入右旋糖苷蓝和酪氨酸作为内标，进样后可同时测得完全排阻和完全进入填料孔隙的两种内标的保留时间To和Tt，用分配系数（kd）对分子量对数（lgM。
W。）作图，从而保证测定结果有较好的重现性。结果见表图 （表图） 样品测定根据样品的保留时间T求出其分配系数（公式）由从标准蛋白分子量曲线上查出相应的lgM。W．，计算出分子量。
测定了3个厂家的7批rh－TNF 衍生物样品，其中3批分子量为45000，提示其天然活性成分形式可能是三聚体；而其他4批分子量为36000，提示其天然活性成分形式可能是二聚体。 （标准蛋白色谱图） HPGFC法测定蛋白质分子量，具有快速、准确、重现性好、简便易行、样品用量少（微克级）等优点，是一种测定蛋白质分子量的重要方法。
例如胰酶中脂肪含量测定是用乙醚提取后挥散乙醚，残渣在105℃干燥2hr称重并计算。 2．挥发法是利用被测组分具有挥发性，或将它转化为挥发性物质来进行含量测定的方法。“炽灼残渣”为直接挥发法的一种特殊方式：“干燥失重”为间接挥发法。
3．沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化成难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，然后经过滤、洗涤、烘干或炽灼，最后称重并计算其含量的方法。 根据样品中某些成分与标准溶液能定量地发生酸碱中和、氧化还原或络合反应等进行测定。
如胰酶的淀粉酶测定是利用氧化还原反应，以淀粉为底物，经淀粉酶水解后产生还原糖，在碱性溶液中还原糖又将斐林试剂中的CUZ＋还原成Cu＋，多余的Cu＋在酸性溶液中与KI作用析出碘，然后用硫代硫酸纳滴定所析出的碘，来推算糖的含量，进而标定淀粉酶的效价。
又如L盐酸精氨酸是用电位滴定法测定含量的。 （三）比色法 医学。全。在。线网站 样品与显色剂可发生颜色反应，依颜色反应的强度测定含量。如蛋白质的含量测定，可利用蛋白质与双缩脲试剂发生颜色反应，而进行定量测定。
硫酸软骨素的含量也是用比色法测定的，具体介绍如下。 本品系自猪的喉骨、鼻中骨、气管等软骨组织提取制得的酸性粘多糖。 按干燥品计算，含氨基己糖以氨基葡萄糖计算，应不得少于24．0％。
本品采用Elson-Morgan色法测定含量，其基本原理为样品先用盐酸水解生成氨基己糖，然后在碱性条件下与乙酰丙酮反应，生成色原物质，再与对二甲氨基苯甲醛反应产生红色，以盐酸氨基葡萄糖为对照品，用比色法测定。
对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖0。1g，置l00ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置l00ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。
每1ml中含盐酸氨基葡萄糖0。1mg。 供试品溶液的制备取本品约0．15g，精密称定，置50ml量瓶中，加6mol／L盐酸液使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取5rrll置5Oml量瓶中，密塞，置水浴中水解2h，取出放冷，用氢氧化钠溶液（1→5）中和至中性，加水至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，弃取初滤液，保留续滤液备用。
测定法精密量取对照品与供试品溶液各1ml，各取2份，分别置4支具塞试管中，各加水至5ml；另取具塞试管一支，加水5ml作为空白，各加乙酰丙酮试液 1ml，摇匀，置水浴中（1ml后密塞），准确加热25min，取出，用冰水迅速冷却后，加无醛乙醇3m1，在6O℃水浴中保温10min后，再加对二甲氨基苯甲醛试液1ml，强力振摇，并继续在60℃水浴中保温1h，立即用冷水冷却至室温，照分光光度法，在525nm的波长处分别测定对照品溶液与供试品溶液的吸收度，以两份的平均值，按下式计算： （计算公式） 式中互为供试品溶液吸收度的平均值，s为对照品溶液吸收度的平均值，Ws为对照品溶液每lml中含盐酸氨基葡萄糖的量（mg），W为供试品重量（mg）， 0。
8309为氨基葡萄糖与盐酸氨基葡萄糖分子量的比值。本法专属性强，操作简便、结果稳定。值得注意的是实验中所用乙醇必须是无醛乙醇。否则，将影响测定结果的准确性。 （四）紫外分光光度法 样品或转化后的产物在某一波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，其浓度与吸收度成正比，则可进行定量测定。
如蛋白质在280nm左右有最大吸收，胰蛋白酶与底物N－乙酰－L酪氨酸乙酯作用后的产物在237nm处有最大吸收，根据其吸收度可进行定量。 （五）高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）法的种类很多，应用也十分广泛，现将生化药物中常用的方法概述如下。
1．反相高效液相色谱法（RP－HPLC）以（C4、C8、C18）烷基硅烷键合相为柱填料，以甲醇-水、乙腈-水或甲醇、乙腈与缓冲液构成的溶液为流动相，以紫外、荧光或电化学检测器为检测手段，这种色谱体系在生化药物（例如肽类、氨基酸、蛋白质、多糖等）定量分析中应用广泛。
例如：生白能（leucomax）的含量测定就是采用RP－HPLC法。 本品系基因工程药物。它的活性成分为重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（γHUGM·CSF），是一种调节造血和白细胞功能所必须的蛋白质。
含量测定方法如下。 磷酸缓冲液的配制：称取Na2HPO43。 55g，加水400ml，溶解后用稀磷酸调pH至7。0，加水至500ml，摇匀。 供试品及对照晶溶液的配制：精密称取供试品或对照品适量，用上述磷酸盐缓冲液配制成300μg／ml的溶液即可。
仪器与色谱条件：岛津HPLC仪（LC10A）。色谱柱规格为15cm×4．6mm，柱填料为TSK ODS120T（5μm）柱温：室温；检测波长：214nmz流动相：A液为0．1％三氟乙酸水溶液，B液为乙腈－1％三氟乙酸水溶液（90：10）；梯度洗脱： （表） 流速：1。
0ml／min。在上述条件下依次注入对照品、样品溶液各20μl作HPLC分析，其色谱图见图。 计算方法按峰面积外标法计算。本品含量应为标示量的85。0～110。0％。
本法准确度高（回收率大于98％），精密度好（RSD小于2％）。tR21。236min的峰为生白能的主成分，tR13。 639min的峰为人血白蛋白（生白能的添加剂），主成分与添加剂的分离度R＞2。
0。 本法采用梯度洗脱，使主成分与添加剂的分离十分完全。流动相中加入三氟乙酸，增大了对蛋白质的洗脱力，且使主成分峰形尖锐、对称。 2．高效离子交换色谱法（HPIEC） HPIEC是蛋白质、多肽分离分析中常见的方法之一。
HPIEC具有以下特点： 1）蛋白质、多肽的分离是根据其相应的离子化程度而进行的。暴露在外的带电荷的氨基酸残端的数量（如天冬氨酸、赖氨酸）将影响洗脱过程。 2）分离过程是以盐浓度增大的梯度洗脱法进行的。
样品液必须和进样前的流动相保持相同的pH和离子强度。为获得良好的重现性，样品进样前，柱必须充分平衡。 典型的分离梯度是缓冲液为0。3～1。0mol／L的盐溶液。如有可能应尽量避免使用卤素类盐以延长不锈钢柱的寿命。
3）柱效中等并具有较高质量的活性回收。虽然获得的峰比反相色谱更宽，但活性回收更佳。活性蛋白质的回收可通过不同强弱交换类型的选择而优化。对于一些敏感蛋白质，如果回收有问题，弱型离子交换剂可获得更好的活性和质量回收。
医学。全在。线 （3）高效凝胶过滤色谱法（HPGFC） HPGFC可用于多肽和蛋白质等生化药物的分离及其分子量的测定。HPGFC柱上填充着微粒状的具有亲水性表面组成的有机物载体或表面性质得到改造的硅胶类物质。
HPGFC有如下优点： 1）活性蛋白质可得以回收。 填料和样品间的相互作用在所有的液相色谱技术中，本法是最温和的。因此，活性蛋白质几乎可以全部回收，除非流动相中含有变性剂，如尿素等。
2）分离是在固定比例的水溶液中进行的。流动相通常为缓冲液。为了提高分离能力，可加入少量的能与水互溶的有机改性剂或表面活性剂。 3）分离是根据蛋白质．或多肽在溶液中相应的有效粒径而进行的。
当蛋白质具有相同的形状（如球状或纤维状）时，通常可以根据分子量来预示组分的洗脱顺序，故可用来测定蛋白类药物的分子量。 例如：用HPGFC法测定重组人肿瘤坏死因子（rh－TNF）衍生物的分子量，现介绍如下。
rh-TNF属基因工程药物，其分子量的测定是该药质量控制的主要指标之一。 仪器与色谱条件：岛津LC－10A HPLC仪；色谱柱：Beckman Ultraspherogel SEC3000（30cm×7。
5mm）柱；流动相为0。1mmol／L KH2P04：0。1mmol／L Na2S041：1）＋0。05％叠氮化钠，流速1ml／min；检测波长为280nm。 标准蛋白分子量曲线的制备选用四种蛋白：醛缩酶、血清白蛋白、碳酸酐酶及抑蛋白酶肽制成混合标样。
考虑到流速等因素对保留时间T的影响而选用了内标法，即在混合标样中加入右旋糖苷蓝和酪氨酸作为内标，进样后可同时测得完全排阻和完全进入填料孔隙的两种内标的保留时间To和Tt，用分配系数（kd）对分子量对数（lgM。
W。）作图，从而保证测定结果有较好的重现性。结果见表图 （表图） 样品测定根据样品的保留时间T求出其分配系数（公式）由从标准蛋白分子量曲线上查出相应的lgM。W．，计算出分子量。
测定了3个厂家的7批rh－TNF 衍生物样品，其中3批分子量为45000，提示其天然活性成分形式可能是三聚体；而其他4批分子量为36000，提示其天然活性成分形式可能是二聚体。 （标准蛋白色谱图） HPGFC法测定蛋白质分子量，具有快速、准确、重现性好、简便易行、样品用量少（微克级）等优点，是一种测定蛋白质分子量的重要方法。
热度TOP
-
为什么说向你借钱的男人不能嫁?
12158人阅读
-
-
徐州华美吸脂怎么样？
39人阅读
-
做爱后阴道出血是怎么回事？
41人阅读
-
能瞒得住吗？。。。
39人阅读
-
义乌哪家男科比较好，义乌常春怎么样？
40人阅读
相关推荐
加载中...