核蛋白提取试剂盒的使用方法有哪些呢?
使用方法:A.细胞蛋白提取1。取5-10×106个细胞,在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。2。用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。3。 每20ul细胞压积中加入200μl冷的BufferA,2ul蛋白酶抑制剂混合物,高速涡旋振荡15秒,置冰上10分钟。4。再次高速涡旋振荡5秒,然后在4℃,16000×g条件下离心5分钟。5。快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。 6。在沉淀中加入200μl冷的BufferB,2ul蛋白酶抑制剂混合物,高速涡旋振荡15秒。7。置冰上40分钟,每隔1...全部
使用方法:A.细胞蛋白提取1。取5-10×106个细胞,在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。2。用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。3。
每20ul细胞压积中加入200μl冷的BufferA,2ul蛋白酶抑制剂混合物,高速涡旋振荡15秒,置冰上10分钟。4。再次高速涡旋振荡5秒,然后在4℃,16000×g条件下离心5分钟。5。快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
6。在沉淀中加入200μl冷的BufferB,2ul蛋白酶抑制剂混合物,高速涡旋振荡15秒。7。置冰上40分钟,每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。8。在4℃,16000×g条件下离心10分钟。9。
快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。B.组织蛋白提取1。取适量组织样本剪碎,加冷PBS,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨),冰上静置5分钟,小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2。在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,弃上清。3。按照细胞蛋白的提取方法的第3步骤往下操作即可。上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。收起