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求助高手!转化后菌液生长速度忙是什么原因?

我现在在做原核表达方面的实验,光连接快做了一个月了,总是连不上,郁闷!我用的载体是pET28c,目的片段是连在T载体上的,两者同时用EcoRⅠ和HindⅢ同时双酶切后胶回收,酶切片段检测都正确,连接后用蓝白斑筛选都正常,就是在挑取单菌落后,摇菌,菌液后期生长慢,这次甚至还在试管底部出现了些白色沉淀,我百思不得期解,请教各位高手是什么原因?

全部回答

2007-02-01

0 0

有可能是你要表达的基因产物对宿主菌有抑制作用,换个宿主菌株或换个表达载体试试。试管中有白色沉淀说明死菌存在,另外不加抗生素尝试一下,待菌生长旺盛后加入抗生素。

2007-02-02

31 0

告诉你诀窍,加1%的葡萄糖,一切都解决啦。

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