什么是孢子分离法？
孢子分离法也称为孢子弹射分离法，是利用某些药用真菌子实体成熟后自行弹射孢子的特性，在无菌条件下，使弹射的孢子落到适宜培养基上，在适宜条件下进行培养，孢子萌发成菌丝，从而获得纯菌种的一种方法。(1) 分离材料的选择与消毒孢子分离材料，来自于多年人 工栽培的优良品系和野生的种菇。 在同一个生长条件下，栽培同一种药用真菌不同的品系，其生产效益和品质有很大差异；而同 一个品系栽培在不同的环境条件下，其优良性状表现也不同，就 是在相同环境条件下栽培的同一个品系，其单株之间也会出现差异。 因此，应选择长期栽培的优良品种的优良单株作为分离材 料。野生的菌株，未经过人工栽培，不知其优良性状、抗逆能力 ...全部
孢子分离法也称为孢子弹射分离法，是利用某些药用真菌子实体成熟后自行弹射孢子的特性，在无菌条件下，使弹射的孢子落到适宜培养基上，在适宜条件下进行培养，孢子萌发成菌丝，从而获得纯菌种的一种方法。(1) 分离材料的选择与消毒孢子分离材料，来自于多年人 工栽培的优良品系和野生的种菇。
在同一个生长条件下，栽培同一种药用真菌不同的品系，其生产效益和品质有很大差异；而同 一个品系栽培在不同的环境条件下，其优良性状表现也不同，就 是在相同环境条件下栽培的同一个品系，其单株之间也会出现差异。
因此，应选择长期栽培的优良品种的优良单株作为分离材 料。野生的菌株，未经过人工栽培，不知其优良性状、抗逆能力 和生产性能如何，只能作为育种搜集原始材料时进行孢子分离，经过培养品系之间对比试验，选择优良者进行生产，在选优去劣 的培养过程中，再在群体中选择优良个体，作为孢子分离的 材料。
理想的种菇应该是具有该品种主要典型的特征，发育正常，个体健壮，无病虫害，成熟适度的子实体。种菇选定后，可将其周围 10厘米左右范围内的小菇全部摘除，适当增加喷水量，有的药用 真菌子实体有菌幕包着，即可待种菇有八、九分成熟时，及时采摘进行消毒。
可剪去菌柄的三分之二，用清水洗去黏附的污物，浸入 0。 1%的升汞溶液中1〜2分钟或在70%的酒精中浸几秒到1分钟， 取出后用无菌水反复冲洗数次，用灭菌的纱布或滤纸吸干表面水分后待用。有些药用菌如香菇的子实体，很小时菌幕就被拉开；或有 的种类根本无菌幕，菌褶裸露于空气中，很难避免有杂菌孢子附着 在菌褶上，则应采摘成熟的子实体，剪去三分之二的菌柄，用75%的酒精揩擦菌盖及菌柄表面，并在插人孢子收集器后6〜12小 时内，种菇孢子已弹出而附在上面的杂菌孢子短时间内还未脱落时 取出子实体。
而对于胶质菌类的子实体，只能用无菌水洗涤，用无菌纱布吸干表面水分后待用。(2) 孢子的采集种菇经消毒处理后，即可采用以下方法收集 孢子。孢子弹射采集法：利用孢子自动弹射出子实层的特性，采集孢子。
一般采用整株插种法、三角瓶钩悬法和试管贴附法，全部操作过程都应该在无菌条件下进行。① 整株插种法：适于伞菌类孢子的采集。首先应准备好孢子 采集器，用搪瓷盘或大于钟罩的培养皿作底盘，上面放一个小培养皿，皿内放一个不锈钢的支架，用钟罩盖在小培养皿上，将整套孢 子采集器用双层纱布或报纸包好，经高压灭菌后备用。
在无菌条件下打开孢子采集器，揭去钟罩，为了防止钟罩与培养皿接触处杂菌侵人和增加采集器内部的湿度，在大培养皿内铺 2〜3层灭菌的纱布或脱脂棉，倒人0。1 %的升汞液，以浸湿纱布为 度，然后放人小培养皿，将消毒后的子实体插在支架上盖钟罩后，根据不同分离对象，移至18〜25°C条件下，培养6小时至2天， 待小皿内弹射并沉积一层孢子后，移入无菌室，先用75%的酒精 或0。
1%升汞擦拭钟罩外部，打开钟罩取出子实体，小培养皿加盖密封，供分离用。② 三角瓶钩悬法：适用于不具菌柄子实体孢子的采集，如胶 质菌银耳、木耳等。在无菌条件下，将耳片用无菌水冲洗数次后，用无菌纱布吸干水分，将耳片挂在金属钩上，钩子的另一端挂在三 角瓶口上，瓶内装有PDA培养基，加棉塞，置25°C温度下培养 1〜2天，当培养基表面有一层孢子粉时，把三角瓶拿到无菌室取出耳片和钩子，仍塞好棉塞继续培养。
③ 贴附法：取一块经消毒的成熟菌褶或耳片，用灭菌的琼脂 或浆糊，黏附在装有PDA培养基的试管斜面或培养皿皿盖正上方，加棉塞或盖皿盖后置室温下培养，待孢子自然落下后，在无菌 室内慑除菌褶或耳片，或将落有孢子的培养基转移在新的试管斜面 及培养皿平板培养基上，加塞或加盖后继续培养。
④ 孢子印采集法：取成熟的子实体经表面消毒后，切去菌柄， 置于灭过菌的白色或黑色蜡光纸上，罩上通气钟罩，在24°C下静置数小时后，轻轻移去种菇，可见有大量孢子落在纸上。将有孢子 印的纸在无菌条件下保存备用。
⑤ 菌褶涂抹法：在接种室内，将成熟的子实体表面消毒，去掉菌柄，用消毒的接菌环插入两片菌褶之间，轻轻涂抹褶片，将尚未弹射的孢子沾在接种环上，然后用划线法接种在准备好的斜面培 养基上或平板培养基上。
操作时，要严格在无菌条件下，动作要 准确。⑥ 空中孢子捕捉法：伞菌子实体成熟后，孢子大量弹射，在 子实体周围可见烟雾状的“孢子云”，将准备好的培养基平板或试管口迎着“孢子云”方向，使孢子附着在培养基表面，随即盖上皿 盖或加棉塞即可。
(3) 孢子的分离采集到的孢子，一般需要经过分离选择后， 才能制作原种。孢子的分离根据接种到培养基上的孢子数量而分单孢分离和多孢分离两种。有些菇类的孢子，具有单孢结菇的能力， 可采用单孢分离纯菌种的方法；有些种类如香菇、木耳、金针菇等 药用真菌的单孢菌丝，只有经过质配后才能结菇，多采用多孢分离法，多孢分离方法简单、易操作、没有不孕现象，在生产上常采 用；但不能选择优良单孢繁殖后代，如果进行杂交育种时，仍应进 行单孢分离。
单孢分离：从采集到的孢子群中，挑出单个孢子进行培养，单独萌发成菌丝而获得纯菌种的方法。按分离手段可分为稀释法、划 线法、毛细管分离法和器械分离法。多孢分离：因采收孢子的方式不同，可分为直接培养法、斜面划线法、涂布分离法。
① 直接培养法：采用孢子弹射分离法、菌褶涂抹法及捕捉法 收集到培养基上的孢子，直接放在25°C下培养；待孢子萌发后挑选特征典型的菌落，转接培养即可。② 斜面划线法：在无菌条件下，用接种针沾取少量收集到的 孢子，在PDA斜面培养基上自下而上划线，划线时不要太用力，以能划破培养基表面的力度。
接种后加棉塞，置适温下培养，待孢 子萌发后，挑选萌发早、生长旺盛的菌落，转接到新试管斜面培养 基上再行培养即可。③ 涂布分离法：在无菌条件下，用接种环挑取少许收集到的孢子，装人有无菌水的试管中，充分摇匀制成孢子悬浮液，然后用无菌的注射器或滴管，吸取孢子悬浮液，注人1〜2滴于斜面或平 板培养基表面，用无菌接种环涂匀，置适温下培养。
孢子萌发后， 挑选发育匀称、生长快的菌落，再移接到新试管斜面培养基上，恒温培养即得母种。收起
