骨质疏松的分型是怎样的?
骨质疏松症是老年人的一种常见病。随着人类寿命的延长和人口的老龄化其发生率逐渐上升,对其防治已成为一个世界性的重要卫生问题之一。要研究此病的发病原因、机制研制各种预防和治疗新药,了解各种治疗手段的作用机理,以及研究置换术治疗骨质疏松性骨折,动物模型作为研究的重要手段,起着不可替代的作用。 选择动物模型,必须确定骨质疏松的类型和所用动物。骨质疏松症可分为3大类:①原发性骨质疏松症,又可分为Ⅰ型(绝经后骨质疏松症)和Ⅱ型(老年性骨质疏松症);②继发性骨质疏松症;③特发性骨质疏松症。 研究者根据自己的研究领域选择相应的动物模型。其中,第3种类型因其特殊性,较少涉及。骨质疏松模型常用动物有大鼠、...全部
骨质疏松症是老年人的一种常见病。随着人类寿命的延长和人口的老龄化其发生率逐渐上升,对其防治已成为一个世界性的重要卫生问题之一。要研究此病的发病原因、机制研制各种预防和治疗新药,了解各种治疗手段的作用机理,以及研究置换术治疗骨质疏松性骨折,动物模型作为研究的重要手段,起着不可替代的作用。
选择动物模型,必须确定骨质疏松的类型和所用动物。骨质疏松症可分为3大类:①原发性骨质疏松症,又可分为Ⅰ型(绝经后骨质疏松症)和Ⅱ型(老年性骨质疏松症);②继发性骨质疏松症;③特发性骨质疏松症。
研究者根据自己的研究领域选择相应的动物模型。其中,第3种类型因其特殊性,较少涉及。骨质疏松模型常用动物有大鼠、家兔、山羊、狗、猕猴等,但以大鼠为最多,故文章以大鼠为主,说明各种模型的制作方法、成模机理、造模后动物骨代谢等各方面的变化及各自的特点。
长骨的构造1 原发性骨质疏松症 绝经后骨质疏松症模型绝经后骨质疏松症最常见于绝经不久的女性(多在51岁~65岁)。雌激素主要抑制骨吸收,绝经后妇女由于卵巢功能下降,引起雌激素的缺乏,可造成骨吸收增强,从而导致快速的骨丢失,为高转换型。
快速的骨丢失主要发生在梁小骨,特别是脊柱和桡骨远端。绝经后骨质疏松模型即自发或诱发卵巢功能缺陷而复制的活体动物模型,这种模型可以较好地模拟绝经后骨质疏松症的骨代谢特点及产生的结果。而检测指标及模型的确认涉及大鼠雌激素、骨代谢、骨密度、骨计量及骨生物力学等各个方面。
(1) 雌性动物去势造模。绝经后骨质疏松的动物模型于1969年首先由Saville用大鼠建立,后经反复证实,现在去势雌鼠骨质疏松模型已成为标准化的公认的绝经后骨质疏松症经典病理模型。造模的方法主要是选择合适月龄的雌性大鼠,无菌手术切除双侧卵巢,一定时间后处死,处死前后采取血液、尿液、骨或骨髓等标本,进行各项指标的检测。
研究者在制备去势模型时,常用2月龄~6月龄大鼠,而此时大鼠性成熟还不久,由于骨质疏松症的发生与骨成熟时骨密度即峰骨密度密切相关,年轻大鼠骨密度低,尽管可较快地复制出骨质疏松症模型,但由于基本生理条件仅能代表年轻机体,与临床绝经后骨质疏松的发病过程不尽吻合。
大鼠寿命为2。5年~3年,1。7年左右才进入老年期,人类骨质疏松症多在中年后期发生,故采用中老年大鼠,可以复制出较为符合临床特征的动物模型。动物实验发现,去卵巢大鼠雌激素水平下降,促黄体素和促卵泡素水平上升,骨代谢发生异常改变,破骨细胞骨吸收活动加速,骨无机盐和有机质丢失增加,而成骨细胞骨形成功能并未因卵巢切除而受到抑制,反而代偿性增强,为高转换型骨代谢,造成骨密度下降,骨组织形态学及超微结构遭到破坏,导致骨生物力学性能的下降,另外,还可看到子宫明显萎缩,椎间盘有不同程度的退变,这些都与人的绝经后骨质疏松症十分相似。
去势大鼠模型的局限性:①去势模型虽然很好地体现了雌激素水平下降这一重要病因,但与临床实际不符。骨质疏松症患者,虽然卵巢功能低下,但其卵巢间质细胞在绝经后仍具有一定程度上的内分泌功能;②它终身在不断地生长,不能达到真正的骨骼成熟,也缺乏皮质内改建;③手术去势造模,本身就是一种创伤,对鼠机体造成负氮平衡,应激反应,电解质紊乱等全身性影响,对模型指标的检测造成干扰;④由于骨质疏松是一种进展性疾病,药物治疗反应需要花费数年时间,在这样长期研究中,需要大量抽取血液和骨组织活检标本,而大鼠由于体积太小,已不能适应这种研究过程。
(2) 非手术造模。不摘除动物卵巢,而给予影响动物内分泌的药物,抑制动物生理状态下的雌激素分泌,经过一定时间后,测定动物骨组织各项指标。常用制备此种模型的药物有:①buserelin(商品名),是一种促黄体素分泌激素的类似物,为促黄体素分泌激素受体的激动剂,有降低血清雌二醇(E2)含量的作用;②Casodex,纯粹的非甾体类雄激素颉颃剂,它可使体内雌二醇耗竭;③促性腺激素释放激素(GnRH),使用后可以造成动物的骨质丢失。
通过血清雌二醇含量测定、大鼠阴道涂片检查及子宫重量等指标的观察,可见药物法能成功地模拟绝经后状态老年性骨质疏松模型老年性骨质疏松症多在65岁以后发生,主要侵犯椎体和髋骨,与高龄、慢性钙缺乏、骨形成不足有关,属低转换型骨质疏松症。
目前,尚无专门的老年性骨质疏松的大鼠模型,有人用老龄期前或老龄大鼠肌注地塞米松模拟老年性骨质疏松症,虽然使其骨密度和骨组织形态学等方面的改变类似于老年性骨质疏松症,但两者的发病机理和病程发展是不同的,因而并不适宜于老年性骨质疏松症的研究。
SAMP6小鼠属快速老化模型小鼠(Senescenceaccelerated mouse,SAM)的骨质疏松型,它是仅有的一种能证明增龄性骨脆性骨折的实验动物SAM小鼠是日本京都大学竹田俊男教授和细川昌则教授开发的系列快速老化动物模型,分为快速老化的P品系(Penile-Prone)和正常老化的R品系(Penile-Resistant)。
1993年由天津中医学院第一附属医院韩景献教授引入中国,在天津中医学院第一附属医院动物中心落户繁殖,十年来保持了其原有的快速老化特性。其中SAMP6以自然发生快速老化、短寿、老年性骨质疏松(Senile osteoporosis)为特征。
其骨质疏松的特点为:4个月~5个月骨量达到峰值,然后随增龄其骨量降低,其峰值骨量低于正常老化的R品系,并有中老年的自发性骨折倾向SAMP6模型小鼠的骨量及随增龄的骨量丢失在雌雄之间无差异。根据人的骨量丢失情况,SAMP小鼠表现出的骨质疏松可能相当于人老年性骨质疏松。
研究表明,SAMP6成骨细胞的骨形成能力低下、破骨细胞骨吸收亢进、甲状旁腺机能亢进,是研究老年性骨质疏松症的较实用的动物模型。老年男性骨质疏松症模型男性骨质疏松症的研究起步较晚,其发病机理也并不十分清楚,但雄激素减少是男性老年人发生骨质疏松的重要原因之一,基于此,睾丸切除(ORX)大鼠骨质疏松动物模型成为研究男性骨质疏松的重要工具。
雄激素可以通过雄激素特异性受体作用于骨髓基质细胞或成骨细胞,抑制其促进破骨细胞分化的局部细胞因子的释放。而雄激素的缺乏则导致大鼠尿吡啶啉及脱氧吡啶啉分泌增加,骨转换增加,并破坏骨吸收与骨形成之间的动态平衡。
雄性大鼠去睾丸28周后,骨质疏松形成,生化检查显示骨形成降低、骨吸收增加,但ORX对生长期及成熟期大鼠骨骼的影响不同,生长期大鼠ORX后骨量减少主要是由于峰值骨量的积累减弱,而成熟期大鼠ORX后则出现骨量的净丢失增加。
另外考虑到年龄的影响,老龄雄鼠ORX后造成的骨量减少可能涵盖了增龄和去势的双重作用。2 继发性骨质疏松内分泌代谢性骨质疏松症糖尿病(diabetes)是常见的内分泌代谢性疾病以胰岛素缺乏和糖代谢紊乱为主,同时并存钙、磷代谢紊乱,骨质疏松的发病率增加。
张立等用雌性Wistar大鼠以链脲佐菌素(STZ)制成糖尿病动物模型型后,再切除双侧卵巢,制成糖尿病并发绝经后的骨质疏松症动物模型,并发现糖尿病与去势两种因素并存时,可加速骨质疏松的发展进程,与单一因素相比,可加重骨质疏松的程度,为筛选绝经后老年糖尿病患者骨质疏松症的治疗药物提供了动物模型。
其他的内分泌代谢性骨质疏松模型还极少见。营养缺乏性骨质疏松症钙质的缺乏会引起低峰值骨量,骨钙排出,导致骨质疏松。此类动物模型以钙与蛋白的干预为主。研究表明,在低钙状态下,无论进食高蛋白还是低蛋白,都可建立骨质疏松动物模型,但高蛋白饲料组的生长状况接近于进食普通饲料的对照组动物,故制作骨质疏松模型时以高蛋白饲料为宜。
而且,膳食蛋白质加倍,尿钙增加50%,动物蛋白质的高钙尿效应大于植物蛋白质,含硫氨基酸的高钙尿效应大于非含硫氨基酸。人群中蛋白质摄入量与股骨上端骨折发病率显著相关。中国膳食结果中含钙量较少,而且随着生活水平的提高,蛋白尤其是动物蛋白摄入量增加。
营养缺乏性骨质疏松动物模型的研究对于改善人群饮食结构,平衡膳食,预防骨质疏松,有着重要意义。药物性骨质疏松症(1) 糖皮质激素致骨质疏松。糖皮质激素诱发的骨质疏松是最常见的药物性骨质疏松。糖皮质激素在临床上应用非常广泛,如系统性红斑狼疮、皮肤病、类风湿性关节炎、肾病、哮喘、器官移植等疾病的治疗。
长期大剂量使用糖皮质激素,会导致骨质疏松。大剂量糖皮质激素可抑制成骨细胞的分化,而过量糖皮质激素抑制成骨细胞的增殖与分化,使成熟的、具有分泌基质功能的成骨细胞及支撑破骨细胞的成骨细胞数目减少,同时,糖皮质激素还影响成骨细胞的功能,使其不能正常地募集于骨吸收部位来发挥骨形成作用,使骨形成作用延迟,从而造成骨丢失。
此外,还通过减少性激素的分泌,直接刺激破骨细胞,抑制肠道对钙的吸收,增加肾对钙、磷的排泄,激发甲状旁腺功能亢进等,进一步增加骨的吸收,减少骨形成,在总体上使骨形成作用减弱,破骨作用加强,导致骨质疏松。
目前,糖皮质激素诱发骨质疏松所采用的动物以大鼠为主,所用糖皮质激素有醋酸泼尼松、氢化可的松、地塞米松,诱导途径有灌胃、肌肉注射,一般5周~6周即可造模成功。(2) 维A酸致骨质疏松。维A酸是维生素A的衍生物,并有与其相似的药理作用,主要用于皮肤科银屑病、痤疮、皮肤角化过度、皮肤肿瘤等疾病的治疗,伴有骨质疏松副作用。
维A酸诱发的骨质疏松动物模型,由邵金莺等于1989年首创,后来的研究者在应用中略有改进,一般用70 mg/(kg?d~105 mg/(kg?d),连续灌胃14 d,即可造模成功。维A酸致骨质疏松模型有如下特点:在模型发生机理上,维A酸激活破骨细胞促进骨吸收,但不抑制成骨细胞活性,对骨形成和骨基质的矿化过程也无明显影响,结果使骨重建处于骨吸收大于骨形成的负平衡状态,最终使动物出现骨质疏松。
在模型的特征上,除骨量显著减少外,骨组织显微结构病理改变非常典型,骨小梁稀疏、骨皮质变薄和骨髓腔扩大都十分明显,但与骨质疏松发生有关的血中性激素和Ca,P,ALP等生化指标却无变化。该动物模型对维A酸诱发的骨质疏松防治、新药的研发有重要意义。
废用性骨质疏松症长期卧床或不活动,即无重力负荷的状态,可使得正常骨代谢遭到破坏,破骨细胞相对活跃,造成骨钙溶出,尿钙排泄增加,血钙上升,发生骨萎缩或骨质疏松。老年人骨质疏松废用性骨质疏松动物模型造模的方法有很多种,但其目的都是将实验部位制动,造成骨质疏松有全身制动,如将大鼠圈养在小笼内,局部制动如局部石膏固定、脊髓半横断术、脊神经前根切断术、坐骨神经切断术、周围神经切断术、肌键切断术、后足切除术、尾巴悬吊、绑腿、腿-尾固定法、套筒法、去卵巢再加脊髓半横断术、去卵巢再加坐骨神经切断术和绑腿再加去卵巢等。
制动可很快影响到骨代谢去神经后12d即可出现明显的骨质疏松。废用性骨质疏松动物模型对防治瘫痪、骨折、术后等长期卧床病人及航空人员出现的骨质疏松有重要意义。 其他洪志勇等为大鼠行甲状旁腺切除术,3个月后大鼠股骨骨皮质指数显著下降,骨质疏松模型建立这可能是因甲状旁腺素的缺乏使体内1,25(OH)2D3合成减少,肠道对食物中钙、磷吸收减少肾脏对钙的重吸收作用减弱,以致动员体内钙库,骨吸收和分解加速,从而导致骨质疏松。
骨质疏松动物模型多种多样,各有其特点,研究者应根据自己的研究范围,选择合适的动物模型,使之更贴近临床,在临床防治和新药的研发筛选中更具有指导意义。收起