嵌合病毒的技术路线有哪些？
克隆法嵌合病毒的获得大多是利用感染性克隆技术，目前已有部分黄热病毒属病毒获得了感染性克隆，如YFV、TBEV、Kunjin病毒、墨累河谷脑炎病毒(MVE)、西尼罗河病毒(WNV)、DEN4型病毒，这些克隆包含有病毒的全部基因，能够在宿主菌中稳定地复制和传代，以作为种子批保存。 当构建嵌合体时，在供体基因和受体基因的连接处，通过同义突变或者保守突变，为受体株和供体株基因组添加合适的酶切位点，然后将两者利用酶切位点连接起来，制备嵌合性克隆，体外经RNA聚合酶作用转录出嵌合性转录子，转染细胞后重新获得嵌合病毒。 这项技术的一个优点在于在它是在cDNA水平上的操作，突变率低、表型稳定，不像传统...全部
克隆法嵌合病毒的获得大多是利用感染性克隆技术，目前已有部分黄热病毒属病毒获得了感染性克隆，如YFV、TBEV、Kunjin病毒、墨累河谷脑炎病毒(MVE)、西尼罗河病毒(WNV)、DEN4型病毒，这些克隆包含有病毒的全部基因，能够在宿主菌中稳定地复制和传代，以作为种子批保存。
当构建嵌合体时，在供体基因和受体基因的连接处，通过同义突变或者保守突变，为受体株和供体株基因组添加合适的酶切位点，然后将两者利用酶切位点连接起来，制备嵌合性克隆，体外经RNA聚合酶作用转录出嵌合性转录子，转染细胞后重新获得嵌合病毒。
这项技术的一个优点在于在它是在cDNA水平上的操作，突变率低、表型稳定，不像传统疫苗研制过程中容易发生一系列的生物特性改变。融合PCR利用PCR技术制备嵌合病毒最大的优点在于方便快捷，过去几个月的工作现在几天就能完成。
目前生物技术产品日臻完善，不少公司推出高保真、热稳定性好的逆转录酶和DNA聚合酶，如SuperscriptII逆转录酶、LAro~酶、Exraq酶、ExpandlongtemplatePCR聚合酶系统等，利用这些酶可以有效地扩增出病毒基因组大片段(>5kh)甚至全长的cDNA。
用4条引物、3次PCR可以把两个异质基因片段连接在一起。另有报道利用3个引物、两次PCR即可制备嵌合基因，如YF—MOD嵌合病毒。与克隆技术相比较，PCR方法更为灵活，可以选择任意位置进行嵌合；但是PCR具有一定的突变率，可能会带来一些致死性突变而使转录体不具有感染性，得不到恢复病毒从而前功尽弃，所以现在大多数实验还是采取克隆法。
灭活病毒之间的基因重组是将两种或者两种以上的灭活病毒，在同一细胞内培养后，它们之间发生基因重组，有时会产生感染性病毒，这种方法又称为多重复合，可能由于灭活病毒受损的基因经重组后得以替补。如为了解包膜病毒的融合活性，利用黄热病毒YF一17DD和流感病毒X31两者不同的融合条件，以及核衣壳不同的形态，将YF一17DD通过酸处理失去融合活性，X31通过热处理灭活，两者在YF一17DD灭活的同一pH值下发生融和反应，只有发生融和反应的嵌合病毒具有感染性；流感病毒提供功能型膜蛋白融合成分，YF一17DD提供功能基因组，结果两个灭活病毒又重新构建成新的病毒。
这项技术随机性很大，但是可能得到意想不到的结果，可以用于病毒功能的研究。收起
