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氨苄青霉素抗性平板的用途是什么?

质粒dna的转化,氨苄青霉素抗性平板的用途是什么?

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2013-10-14

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    照你的表述,EcoRI酶切位点是在卡那霉素抗性基因内部? 那么,如果这个抗性基因插入了你的目的基因,那么这个基因就被破坏,也就失去了卡那抗性。 所以,插入了目的基因的质粒,应该是只有氨苄抗性的。
  所以转化之后涂平板,不能用双抗,只能用氨苄抗性。 要鉴别是否插入目的基因,很简单: 1,菌落pcr:从转化平板上随机挑选几个菌落,用普通pcr体系,以菌体为模板,做pcr,然后跑胶鉴定。  (我的经验,这一步阳性了就基本准了) 2,从菌落pcr阳性菌内提质粒酶切鉴定。
  (这个最准) 3,如果你实在是要求用抗性来筛(其实抗性筛选不是很准),你用两种平板,一种是amp平板(也就是转化用的平板),一种是amp+kan平板,你用接种环或者灭过菌的牙签,从amp转化平板上的菌落点一下,再在amp +kan平板上原位点一下,培养。
     如果同一个菌落,只能在amp上长,而不能在双抗上长,就可能是重组质粒。

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