血吸虫病的免疫学检查方法有哪些?
(1)皮内试验:皮内试验是利用宿主机体变态反应的局部皮 肤表现来诊断有无感染。它的基本原理是注入皮内的血吸虫抗原 与相应的抗体结合后作用于组织肥大细胞,产生脱颗粒现象,释 放组胺,引起血管通透性改变,使注射处局部产生皮肤红晕与丘
疹。
皮内试验方法简便,取日本血吸虫成虫冷浸抗原(一般常用 1:8000浓度)皮内注射0。03ml,15分钟后测丘疹直径,大于 0。8cm以上者为阳性。
皮内试验与粪检结果有较高的符合率,在粪检阳性的日本血 吸虫病患者,皮内试验的阳性率一般可达95%以上,健康人的 假阳性率为2%左右。
皮内试验有较高的敏感性,但特异性较差,虽不能用作确诊 的方法,仍可作为...全部
(1)皮内试验:皮内试验是利用宿主机体变态反应的局部皮 肤表现来诊断有无感染。它的基本原理是注入皮内的血吸虫抗原 与相应的抗体结合后作用于组织肥大细胞,产生脱颗粒现象,释 放组胺,引起血管通透性改变,使注射处局部产生皮肤红晕与丘
疹。
皮内试验方法简便,取日本血吸虫成虫冷浸抗原(一般常用 1:8000浓度)皮内注射0。03ml,15分钟后测丘疹直径,大于 0。8cm以上者为阳性。
皮内试验与粪检结果有较高的符合率,在粪检阳性的日本血 吸虫病患者,皮内试验的阳性率一般可达95%以上,健康人的 假阳性率为2%左右。
皮内试验有较高的敏感性,但特异性较差,虽不能用作确诊 的方法,仍可作为临床辅助诊断和疫区大批量人群普查的一种过 筛方法。
(2)环卵沉淀试验(circumoval precipitin test,COP):又称 环卵试验,是诊断血吸虫病常用的免疫学试验。
本试验是抗原与 抗体的沉淀反应,其原理是血吸虫虫卵的抗原性物质与血吸虫病 患者血清中的特异性抗体结合后,在虫卵周围有沉淀物形成即为 阳性反应。
环卵试验的方法,是先取溶化的石蜡在洁净的载玻片上画两 条相距约20mm的蜡线,在其间滴加受检者血清2滴,然后用针 尖挑取日本血吸虫干卵(约100〜150个)或用滴管将鲜卵悬液 1滴,(约含虫卵100个)加入血清中混匀。
再用盖玻片覆盖在 载玻片上,为防止水分蒸发及细菌生长,盖玻片四周用石蜡密封 后,放入37^温箱中,48小时后取出在显微镜下观察。若虫卵 外周出现泡状、指状或带状沉淀物并有明显折光、边缘较整齐者 即为阳性反应,并记录环沉率。
环沉率是指100个成熟虫卵中出 现沉淀物的虫卵数。环沉率大于5%者为环卵沉淀试验阳性,在 1%〜4%之间者为弱阳性。
环卵沉淀试验有较高的敏感性和特异性,是对血吸虫病很有 诊断价值的免疫学试验。
粪检阳性的日本血吸虫病患者,有 95%以上环卵试验阳性。环卵试验在病人治愈后阴转率较高,故 对血吸虫病的诊断与疗效考核均有一定价值。
(3 )尾蝴膜反应(cercarien - hiillen reaktion,GH R ):是血 吸虫尾蚴膜抗原与血吸虫病患者血清内的特异性抗体相互作用形 成尾蚴膜的一种免疫血清学试验。
操作方法是先在载玻片上用凡 士林涂一直径1。3cm的圆圈(或用凹玻片),在其间加受检查血 清2滴,再用针尖挑取日本血吸虫新鲜尾蚴约5〜20条于受检血 清中,将玻片置于保持潮湿的培养皿中,保温于20〜25T环境 中,3〜4小时后取出在显微镜下观察结果,如无反应,可在24 小財后再观察一次。
尾蚴体表形成一层透明胶状膜者为阳性。
尾蚴膜反应诊断血吸虫病有较高的特异性和敏感性,在粪检 血吸虫卵阳性的病人中,尾蚴膜反应的阳性率一般可高达95% 以上。本试验可与异种血吸虫间有交叉反应,尤其与禽类血吸虫 尾蚴感染而致的稻田皮炎易发生交叉反应。
因此,应避免在稻田 皮炎发生季节进行此项检查。、本试验在检测时,需用血吸虫新鲜 尾蚴(应在尾蚴逸出10小时内)作为抗原进行试验,因而影响 在各地推广应用。
(4)间接血凝试验(indirect haemagglutination test,IHA): 是将血吸虫卵可溶性抗原吸附于红细胞表面,使吸咐有抗原的红 细胞成为致敏红细胞。
在存在适宜电解质的条件下,使致敏红细 胞与相应抗体相互作用,产生红细胞凝集现象的特异性抗原一抗 体反应。
本试验方法简便,所用器材简单,有高度敏感性和一定的特 异性。据报道,以纯卵抗原致敏红细胞为抗原,在急性和慢性日 本血吸虫病患者中检测,其阳性检出率达92。
13%〜W0%。在 非疫区的健康人群中,假阳性率在4%以下,已较广泛在临床推 广应用。
(5)酶联免疫吸附试验(ELISA):是将血吸虫抗原或抗体 同酶相结合,使其保持着免疫学的特异性和酶的活性。
经酶联的 抗原或抗体与酶的底物处理后,酶的催化作用,使无色的底物或 化合物发生水解、氧化或还原反应而显示特定的颜色,便表示有 酶联物的存在。
血吸虫病抗体检测是诊断、鉴别诊断血吸虫病,以及对血吸 虫病进行流行病学调查和疫情监测的重要手段。
间接血凝试验、 环卵沉淀试验及间接法酶联免疫吸附试验等已被广泛应用。特别 是酶联免疫吸咐试验,由于其方法简便和敏感性与特异性高,已 被国内外学者公认。
按世界卫生组织热带病规划署推荐的方法,酶联免疫吸附试 验的整个反应时间需6小时;试剂必须冷藏保存,其底物还有诱 变性等;需用仪器读取试验结果等,在应用上受到一定限制。
1996年,中国预防医学科学院寄生虫病研究所严自助等报 道的“血吸虫病抗体的快速测定”技术的建立,为准确、快速、 方便地检测血吸虫病抗体提供更为有效手段。其操作方法是先将 血吸虫抗原经特殊纯化后,包被PVC板保存于-20^,备用; 将受检血清作稀释后加人抗原孔,置37^10 ~ 15分钟,用自来 水或清洁水洗涤3次;将过氧化物酶标记的羊抗人的IgG经处理
后作一定稀释加入各孔,置37t 10〜15分钟,再洗涤5次;加 显色剂后5分钟左右观察结果,以高于阴性对照血清的色泽判为 阳性结果。
本法全反应过程仅30〜40分钟。
近年来,还有采用“试剂条双夹心酶联免疫吸附试验检测日 本血吸虫感染者经尿液排出的循环趋阴极抗原”的报道。
上海逵科大学彭民等报道,利用酶标记Sj65结合蛋白,、建 立斑点酶联免疫吸附试验(Dob-ELISA)检测感染血清中的 Sj65。
Sj65蛋白为来源于日本血吸虫虫卵的循环抗原,该蛋白免 疫原性较弱,但能与一种分子量为68kD的糖蛋白(Sj65结合蛋 白)专一结合。
作者用该法测定离、慢性血吸虫病人血清,阳性率分别为 100%及81。
3%。用该方法测定正常人、兔、鼠、肝炎病人血清 及蛔虫、钩虫病人血清均未见阳性反应。在并殖吸虫病人血清中 可检出Sj65,说明两者有一定的交叉反应。
感染兔经吡喹酮治疗5周后,90%转为阴性。
慢性血吸虫病 人经吡喹酮治疗1年后,有60%转为阴性。结果表明,血吸虫 感染者血清中Sj65的检测,似能反映感染程度及考核治疗效果。
湖北省血吸虫病防治研究所李书华等报道,应用斑点酶联免 疫吸咐试验(Dot-ELISA)检测血吸虫循环抗原,并与间接血 凝试验(IHA)、环卵沉淀试验(COPT)检测抗体,进行诊断血 吸虫病的比较。
结果表明,12例急性血吸虫病患者血清,3种方 法检测均为阳性;277例慢性血吸虫病患者血清3种方法检测的 阳性率分别为79。42%、64。62%和63。18%。14例华支睾吸虫 病患者血清和89名健康人血清的Dot - ELISA检测均为阴性。
10例急性血吸虫病患者在离开流行区经吡喹酮治疗后37周时, 粪检虫卵全部阴性,检测血清循环抗原有4例阴转,其余6例滴 度大幅度下降;IHA检测3例阴转,其余7例几何平均倒数滴度 (1\1111)由47。
57降至9。35;0(^检测平均环沉率由21。5% 降至4。12%。
结果表明,Dot-ELISA检测血吸虫循环抗原具有较好的敏 感性和特异性。这3种方法在血吸虫病的诊断及疗效考核中均有 一定价值。
此外,还有间接荧光抗体试验、对流免疫电泳、限定抗原基 质球试验(defined antigen substrate sphere, DASS)及放射免疫 测定等技术,也都曾作为血吸虫病的诊断和科研手段。
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