高二生物基因工程的问题

DNA聚合酶1和DNA聚合酶II

大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ（DNApolymeraseⅠ，DNApolⅠ）这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶，又称Kornber酶。此酶研究得清楚而且代表了其他DNA聚合酶的基本特点。 　　⑴理化性质：纯化的DNApolⅠ由一条多肽链组成，约含1000个氨基酸残基，MW为109KD。分子含有一个二硫键和一个-SH基。通过二个酶分子上的-SH基与Hg2+结合产生二聚体，仍有活性。 每个酶分子中含有一个Zn2+，在DNA聚合反应起着很重要的作用。每个大肠杆菌细胞中含有约400个分子，每个分子每分钟在37℃下能催化667个核苷酸掺入正在生长的DNA链。经过枯草杆...全部

  大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ（DNApolymeraseⅠ，DNApolⅠ）这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶，又称Kornber酶。此酶研究得清楚而且代表了其他DNA聚合酶的基本特点。
   　　⑴理化性质：纯化的DNApolⅠ由一条多肽链组成，约含1000个氨基酸残基，MW为109KD。分子含有一个二硫键和一个-SH基。通过二个酶分子上的-SH基与Hg2+结合产生二聚体，仍有活性。
  每个酶分子中含有一个Zn2+，在DNA聚合反应起着很重要的作用。每个大肠杆菌细胞中含有约400个分子，每个分子每分钟在37℃下能催化667个核苷酸掺入正在生长的DNA链。经过枯草杆菌蛋白酶处理后，酶分子分裂成两个片段，大片段分子量为76KD，通常称为Klenow片段，小片段的分子量为34KD。
  此酶的模板专一性和底物专一性均较差，它可以用人工合成的RNA作为模板，也可以用核苷酸为底物。在无模板和引物时还可以从头合成同聚物或异聚物。 　　DNAPolⅠ在空间结构上近似球体，直径约65A。
  在酶的纵轴上有一个约20A的深沟（cleft），带有正电荷，这是该酶的活性中心位置，在此位置上至少有6个结合位点：[1]模板DNA结合位点；[2]DNA生长链或引物结合位点；[3]引物末端结合位点，用以专一引物或DNA生长链的3'-OH;[4]脱氧核苷三磷酸结合位点；[5]5'→3'外切酶活性位点，用以结合生长链前方的5'-端脱氧核苷酸并切除之；[6]3'→5'外切酶活性位点，用以结合和切除生长链上未配对的3'-端核苷酸。
   大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ（DNApolⅢ）：DNA pol Ⅲ全酶由多种亚基组成(见下表），而且容易分解。大肠杆菌每个细胞中只有10-20个酶分子，因此不易获得纯品，为研究该酶的各种性质和功能带来了许多困难。
  直到不久前，才对其性质和功能有所了解，但每个亚基的具体作用扔不十分清楚。尽管该酶在细胞内存在的数量较少，但催化脱氧核苷酸掺入DNA链的速率分别是DNA聚合酶Ⅱ的15倍和30倍。该酶对模板的要求与DNA聚合酶Ⅱ相同，最适模板也是链DNA中间有空隙的单链DNA，单链结合蛋白可以提高该酶催化单链DNA模板的DNA聚合作用。
  DNApolⅢ也有3'→5'和5'→3'外切酶活性，但是3'→5'外切酶活性的最适底物是单链是DNA，只产生5'-单核苷酸，不会产生二核苷酸，即每次只能从3'端开始切除一个核苷酸。5'→3'外切酶活性也要求有单链DNA为起始作用底物，但一旦开始后，便可作用于双链区。
  DNA聚合酶Ⅲ是细胞内DNA复制所必需的酶，缺乏该酶的温度突变株在限制温度（non permissive temperature）内是不能生长的，此种突变株的裂解液也不能合DNA，但加入DNA聚合酶Ⅲ则可以恢复其合成DNA的能力。
   DNA聚合酶Ⅲ的组成 亚基 分子量（×103) 其它名称 　　a 140 dnaE蛋白，polC蛋白 　　ε 25 　　θ 10 　　τ 83 　　γ 52 dnaZ蛋白 　　δ 32 dnaX蛋白 　　β 40 dnaN蛋白，copolⅢ。
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