鸡新城疫的实验室诊断方法有哪些?
仅根据流行病学特点、症状和病理剖检变化只能作出初步推断, 新城疫的确诊还须进行实验室病原分离与鉴定、血清学和分子生物 学检测。(1)病毒分离培养选发病初期病鸡的脾、肺、脑、气管或泄 殖腔分泌物,或发病中后期病鸡的脑或骨髓。 无菌处理成乳剂后, 接种于9~11日龄的鸡胚尿旗腔内,37℃温箱孵育;也可用鸡胚成 纤维细胞或鸡肾细胞进行分离培养。收集符合条件的鸡胚尿囊液或 细胞培养物作病毒鉴定。病毒分离除确诊疾病外,还可以对新分离 的病毒进行生物学特性测定,以确定其病毒的毒力。 (2)血清学诊断病毒分离鉴定费时费力,很少用于临床诊断。 新城疫病毒感染后不久,体内可产生循环抗体,所以可通过血清学...全部
仅根据流行病学特点、症状和病理剖检变化只能作出初步推断, 新城疫的确诊还须进行实验室病原分离与鉴定、血清学和分子生物 学检测。(1)病毒分离培养选发病初期病鸡的脾、肺、脑、气管或泄 殖腔分泌物,或发病中后期病鸡的脑或骨髓。
无菌处理成乳剂后, 接种于9~11日龄的鸡胚尿旗腔内,37℃温箱孵育;也可用鸡胚成 纤维细胞或鸡肾细胞进行分离培养。收集符合条件的鸡胚尿囊液或 细胞培养物作病毒鉴定。病毒分离除确诊疾病外,还可以对新分离 的病毒进行生物学特性测定,以确定其病毒的毒力。
(2)血清学诊断病毒分离鉴定费时费力,很少用于临床诊断。 新城疫病毒感染后不久,体内可产生循环抗体,所以可通过血清学 方法检测新城疫抗原或抗体以诊断新城疫。①血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)。
根据新城疫病毒具 有凝集禽类和某些哺乳动物红细胞的特性(以鸡红细胞最佳),病毒 分离出来后,可以进行红细胞凝集,且可被新城疫阳性血清所抑制, 故常用HA和HI对分离的病毒进行诊断。HI除作为病毒鉴定外,还 可鉴定鸡群血清中特异性抗体水平。
如未免疫鸡血清中测出特异性抗体,即判定感染新城疫病毒;免疫鸡群,比较发病前后抗体HI效 价的变化,也可判定是否有新城疫病毒感染;HI试验在流行病学调 查和判定是否发生新城疫具有实用价值,也可确定疫苗免疫的效果,或为免疫计划提供依据。
①琼脂扩散试验(AGP)。AGP试验用于检查死鸡体内的新城 疫病毒。鸡死于新城疫时,脏器中需有大量病毒增殖才能将其致死, 将脏器中的病毒视作抗原,同已知的新城疫阳性血清做AGP试验,如果出现阳性时即可作出诊断。
②中和试验。用已知抗新城疫病毒的血清来鉴定可疑病毒,也 可用已知的新城疫病毒来测定血清中是否有特异性抗体,以确定鸡 群是否感染过鸡新城疫。中和试验可在鸡胚或细胞培养以及易感鸡 中进行。③荧光抗体技术。
荧光标记的抗体与相应的抗原可发生特异性 结合,形成带有荧光的抗原-抗体复合体,在荧光显微镜下,可看到 荧光(黄绿色、红色或蓝色)。该方法对新城疫病毒的检查极快速,且具有高度特异性和敏感性。酶联免疫吸附试验(ELISA)。
能够检验新城疫病毒在细胞培养中的生长情况。如有新城疫病毒生长,在细胞核边缘可见到明显的棕褐色酶染斑点。它能直接检出病鸡或带毒鸡的泄殖腔和口腔中的新城疫病毒。该方法比HA、HI和荧光抗体技术更敏感,特异性 更强,是快速且准确的诊断方法。
④单克隆抗体技术。用单克隆抗体对人工感染和自然感染病例 进行免疫荧光检查,检出率较高。它不仅可用于新城疫的诊断,而 且可进行新城疫部分毒株毒力的定型。(3)分子生物学诊断分子生物学技术具有快速、特异、灵敏 等优点。
①DNA探针检测技术。采用人工合成的特异的寡核苷酸DNA 进行印迹杂交试验,可特异识别新城疫病毒。实时荧光定量RT-PCR法。能够快速检测中、强毒力新城疫病毒,并且能够准确定量病毒载量。收起