高中生物基因工程的一个问题
假设:受体细胞无抗四环素基因和抗青霉素基因,且质体中的抗四环素基因和抗青霉素基因都能正常表达。抗青霉素细菌在超过其抵抗能力的高浓度青霉素环境下同样会死亡。
背景:青霉素属细菌繁殖期杀菌剂,对静止期细菌作用弱。 而四环素为抑菌剂,能抑制细菌蛋白质的合成,使细菌处于静止状态,而无杀灭作用。四环素和青霉素联合使用则产生拮抗作用。
分析:目的基因的插入破坏了抗四环素基因的基因连,因此重组质粒的抗四环素基因不能正常表达。 故有重组质粒的细胞、有普通质粒的细胞、无质粒的细胞的区别是仅表达抗青霉素基因,同时表达抗四环素基因和抗青霉素基因,不表达。
因此筛选的原理就是培养受体细胞,看其能不能产生抗四环...全部
假设:受体细胞无抗四环素基因和抗青霉素基因,且质体中的抗四环素基因和抗青霉素基因都能正常表达。抗青霉素细菌在超过其抵抗能力的高浓度青霉素环境下同样会死亡。
背景:青霉素属细菌繁殖期杀菌剂,对静止期细菌作用弱。
而四环素为抑菌剂,能抑制细菌蛋白质的合成,使细菌处于静止状态,而无杀灭作用。四环素和青霉素联合使用则产生拮抗作用。
分析:目的基因的插入破坏了抗四环素基因的基因连,因此重组质粒的抗四环素基因不能正常表达。
故有重组质粒的细胞、有普通质粒的细胞、无质粒的细胞的区别是仅表达抗青霉素基因,同时表达抗四环素基因和抗青霉素基因,不表达。
因此筛选的原理就是培养受体细胞,看其能不能产生抗四环素,抗青霉素或者同时产生二者。
办法就是将细胞在四黄素,青霉素以及二者均存在的状况下培养,以其存活情况来判断其是否产生四黄素,青霉素以及二者都可以。
具体办法:首先将细胞放在低青霉素环境中,无质粒的细胞死亡。在筛选后的活细胞中加入四环素和较高浓度的青霉素,普通质粒的细胞由于同时产生抗四环素和抗青霉素,抗四环素是细胞处于繁殖期,在超过其抵抗能力的高青霉素环境中死亡。
而有重组质粒的细胞受四环素的影响,处于静止期,故高于其抵抗能力的青霉素对其影响较小,因此有重组质粒的细胞细胞存活。
结论:可以得到活的工程细菌。收起