答: 分离相当纯化的淋巴细胞亚群是细胞免疫检验的基本技术。其原则是根据相应细胞的特性和不同的标志加以选择性纯化。凡根据细胞的特性和标志选择纯化所需细胞的方法是阳性选择法;而选择性去除不要的细胞,仅留下所需的细胞是为阴性选择。常用以下几种方法: (一)E花环沉降法 本法是将淋巴细胞与一定比例的绵羊红细胞混合,待淋巴细胞形成E花环后,继用淋巴细胞分层液分离细胞。浮悬在分层界面而不形成E花环的群则富含B细胞,而沉降在管底的形成E花环的细胞用低渗法处理,使围绕细胞周围的绵羊红细胞快速裂解,则获得纯的T细胞。 (二)尼龙毛分离法 本法利用B细胞和单核细胞具有易粘附于尼龙纤维表面的特性,可将T和B细胞分开。操作原则是取松散而经过处理的尼龙毛(聚酰胺纤维),均匀充填在内径5~6nm的聚乙烯塑料管(饮料管即可)内,经Hanks液浸透保温,将单个核细胞悬液加入柱内,放37温箱静置1~2h。用预温的含10%~20%小牛血清培养液灌洗,洗脱液内含有非粘附的T细胞,重复灌洗几次以除去管内残留的T细胞。再用冷或温培养液边冲边洗边挤压塑料管,此时洗脱液内富含B细胞。如此得到的T细胞纯度在90%以上,B细胞纯度可达80%。 (三)亲和板结合分离法 利用亲和层析法分离淋巴细胞亚群,其原理是各种淋巴细胞亚群具有不同的抗原性,将相应抗体结合于塑料平板上,继加细胞悬液,凡抗原阳性的细胞则与相应抗体结合,抗原阴性的细胞可从未吸附的细胞悬液中获取。同样若用特异性抗原交联在塑料板上,则可分离得具有特异抗原受体的淋巴细胞。淋巴细胞受体与特异抗原或抗体接触,可引起细胞激活,因此,凡欲去除细胞悬液内某一细胞亚群时,本法更适用。如要分离CD4+或CD8+细胞,则可用抗CD4或CD8单克隆抗体吸附。用抗Ig抗体则可分离B细胞。同样,用活化的C3包被,可分离出有C3受体的细胞。 图20-3 亲和分离法图解 (四)荧光激活细胞分离仪分离法 荧光激活细胞分离仪(fluorescenceactivatedcellsorter,FACS)主要由4部分组成:①细胞流动系统及气压流速控制系统,②激光系统,③检测与讯号处理系统,④细胞分选系统。其主要原理是细胞经荧光染色后,通过高速流动系统,细胞排成单行,逐个流经检测区进行测定。当细胞从流动室喷嘴处流出时,超声振荡搅动液流,使液流断裂成一连串的均匀小滴(40000个/s),每小滴内最多含一个细胞(其中只有百分之几的液滴中含细胞),细胞经激光束照射产生荧光和散射光,由光电倍增管接收,转换成脉冲信号,数据经电脑处理,分辨细胞的类型。如识别的是预计所需的细胞时(如T细胞、B细胞要其亚群),在细胞样品流断裂成小滴时,使液滴瞬即感应阳电荷、阴电荷或不带电荷,使所需的细胞在电场偏转下进入不同的收集管。用FACS分离细胞准确快速,能保持细胞活力,并可在无菌条件下进行,但仪器昂贵,极少用于常规,而多数仅作为研究的手段。
医疗健康
答: 那你平时用什么抗凝啊?肝素么?我这个是外行,这么感觉的额...
膀胱癌
答: 红细胞、淋巴细胞等均属血液中的细胞,均是红骨髓中原始造血母细胞的后代,发育的场所、方式不同...
答: 大概20毫升既可以
鼻咽癌
答: 几个解决办法将血液稀释程度再提高一点,并且充分吹打,有时吹打不均匀会导致血凝块影...
答: 淋巴细胞和血液中的其他细胞一样,来源于干细胞。这些干细胞在胚胎成熟的过程中首先出现在早期胚...
人体常识
答: 本法分离单个核细胞纯度可达95%,淋巴细胞约占90% 95%,细胞获得率可达80%以上,其...
生物学
答: 获得皮肤组织后,用含有抗生素的PBS处理组织标本,而 后用手术刀剔取表皮组织,用含有胰...
答: 淋巴细胞免疫技术即抽取男方(丈夫)静脉血,分离出淋巴细胞,注射入女方(妻子)体内,以诱导封...
答: 原因不明的反复自然性流产占习惯性流产(UHA)的50%~70%.在不明原因的反复自然流产中...
答: 根据这一原理,开始用丈夫的淋巴细胞治疗因免疫因素引起的原因不明性习惯性流产。这种封闭抗体能...
产科
答: 功能淋巴细胞(lymphocyte,L):属白细胞的一种,由淋巴器官淋巴细胞...
内科
答: 用机械处理和酶消化方法,从肿瘤局部分离出肿瘤浸润的淋巴细胞,加入高剂量IL-2体外培养,残...
肿瘤科
答: 淋巴细胞的分离免疫细胞取肝素抗凝血1m1加Hanks液1m1稀释后,沿管壁徐徐滴流叠...
取肝素抗凝血1m1加Hanks液1m1稀释后,沿管壁徐徐滴流叠...
答: 蛋白升高,细胞数不高或轻度升高呈“蛋白-细胞分离”。
答: 在正常的妊娠中,胎儿的基因一半来自女方,一半来自男方,胚胎在母体内妊娠就如同一个器官移植一...
答: 分离相当纯化的淋巴细胞亚群是细胞免疫检验的基本技术。其原则是根据相应细胞的特性和不同的标志...
答: :外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同。淋巴细胞分离液是一种密度...
答: T淋巴细胞的分离 http://www.whyandhow.org/cn/inf...