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2019-11-14 10:42:42
自行准备材料:无水乙醇、生理盐水、离心管。 取出析出液和洗涤液,按以下操作: a) 析出液:4。5mL加入25。...[展开]
自行准备材料:无水乙醇、生理盐水、离心管。 取出析出液和洗涤液,按以下操作: a) 析出液:4。5mL加入25。5mL无水乙醇;9mL加入51mL无水乙醇。 b) 洗涤液:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇。
c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。 取尿液5mL(尿液的取用量在1-5mL范围内)置于离心管中,5000 rpm离心5分钟,小心弃上清,向离心管中加入2mL生理盐水,轻轻振荡混匀,5000 rpm离心5 min,弃1900μL上清,剩余100μL上清,振荡混匀。
加入200μL biog裂解液和20μL biog消化液,振荡混匀,56℃水浴10 分钟。 加入500μL析出液,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。
将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,静置2 min,12,000 rpm 4℃离心1 min,弃收集管内废液。 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 min,弃收集管内废液。
将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 min,离去残留的洗涤液。 取出吸附柱,放入新的1。5 mL 离心管内,加入30-60 μL 洗脱液,静置3 min,12,000 rpm 4℃ 离心2 min,收集DNA溶液。
提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。[收起]