RNA提取方法有哪些

    RNAgents总RNA提取系统  
1)Promega有哪些系统用于提取总RNA及poly(A)+RNA？
2)RNAgents®总RNA提取系统的工作原理怎样？
3)RNAgents®总RNA提取系统的一般得率是多少？
4)RNAgents®总RNA提取系统的各组分的功能是什么？
5)RNAgents®总RNA提取系统中平衡的苯酚：氯仿：异戊醇的配比是多少？
6)对初始材料的用量有什么限制？
7)提取RNA用作RT-PCR的方法作了哪些修改？


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1)Promega有哪些系统用于提取总RNA及poly(A)+RNA？
Promega用于提取总RNA及poly(A)+RNA的系统包括：
：用RNAgents®总RNA提取系统从组织及培养的细胞中提取总RNA。
    
：用SV总RNA提取系统从组织，血液及培养的细胞中提取总RNA。
：用PolyATtract®mRNA提取系统从总RNA中提取poly(A)+RNA。
：用PolyTtract®ystem1000从组织及培养的细胞中提取poly(A)+RNA。
    
：用PolyTtract®Series 9600TMmRNA从少量样品中快速提取mRNA（cDNA第一条链的纯化）。

2)RNAgents®提取总RNA提取系统的工作原理怎样？
RNAgents®总RNA提取系统用溶剂法为基础，从多种材料中快速，有效地提取总RNA。
    
简单而言，有亚硫氢胍及巯基乙醇时，制组织匀浆，可使内源的RNA酶失活，n-月桂肌氨酸将核蛋白复合物变性。用酸平衡的苯酚：氯仿：异戊醇抽提后，RNA脱离DNA及蛋白，从混合液中层析到水相。
  抽提后，用异丙醇将RNA沉淀浓缩。用RNAgents®总RNA提取系统所得RNA纯度好，用途广，适用于PolyATtract®mRNA提取系统。  如RNA中必须完全去除染色体DNA，需用1-2个单位的无RNA酶污染的DNA酶处理。
  然后用65oC加热10分钟，或用苯酚及氯仿抽提使DNA酶失活。

3)RNAgents®总RNA提取系统的一般得率是多少？
得率受多个因素的影响，包括组织来源及培养的细胞数。  如提取的RNA量多，可通过光吸收测定（A260读数）来定量RNA， 1OD=40ugRNA。
  
RNAgents®总RNA提取系统的一般得率
组织 总RNA得率
Hela细胞 1。6mgRNA/10的8次方个细胞
鼠内脏 2。3mgRNA/g组织
鼠脾 8。  3mgRNA/g组织
鼠肺 1。
  9mgRNA/g组织
鼠肾 3。1mgRNA/g组织
鼠肝 8。1mgRNA/g组织

4)RNAgents®总RNA提取系统的各组分的功能是什么？
(1) 变性剂: 柠檬酸钠溶液中含亚硫氢胍，巯基乙醇，n-月桂肌氨酸 。
    可变性细胞内及核蛋白复合物，释放RNA。这些试剂还可有效抑制核酸酶。
(2) 苯酚：氯仿：异戊醇（125：24：1）（pH4。7）:酸平衡苯仿可抽提去除杂物。DNA及蛋白沉淀到有机相，RNA留在水相。
  酸性有机溶剂的抽提可免除用氯化锂选择沉淀RNA。用锂沉淀导致小于5。  8sRNA的丢失，并不利于下游操作。
(3) 乙酸钠（pH4。0）：维持变性的细胞裂解液的pH值，及沉淀RNA所需。
  
(4) 异丙醇：沉淀浓缩RNA。

5)RNAgents®总RNA提取系统中平衡的苯酚：氯仿：异戊醇的配比是多少？
苯酚：氯仿：异戊醇的配比是125：24：1，用42mM柠檬酸钠溶液平衡(pH4。
    3-4。7)。这一配比可有效去除染色体DNA。残留染色体DNA会干扰RT-PCR。

6)对初始材料的用量有什么限制？
最初的设计方案是用作提取比较大量的RNA，RNAgents®总RNA提取系统可从5mg 组织，或5倍10的5次方的细胞中提取RNA。
  少量RNA提取的步骤可见RNAgents®总RNA提取系统技术手册TB087。  初始材料用量的上限是每次用1g组织。

7)提取RNA用作RT-PCR的方法作了哪些修改？
快速提取RNA用作RT-PCR，可省去在变性溶液中液化和沉淀的步骤。
  简化的步骤可在90分钟内完成。
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