怎样实现对核酸的吸附和解脱
纯化后的核酸,最后多使用水或者低浓度缓冲液溶解;其中RNA以水为主,DNA则多以弱碱性的Tris或者TE溶解.经典的DNA溶解方法多提倡使用TE溶解,认为EDTA可以减少DNA被可能残留下来的DNase降解的风险;如果操作过程控制得当,DNase的残留几乎是可以忽略的,完全可以直接使用Tris或者水(pH接近7)溶解DNA.基本上,核酸在保存中的稳定性,与温度成反比,与浓度成正比.如果温度合适,保存中核酸发生降解或者消失,首要原因是酶残留导致的酶解,第二个原因则是保存核酸溶液的pH值不合适导致的水解(RNA在弱酸性更稳定,而DNA在弱碱性更合适).还有一个不为人重视的,就是EP管对核酸的影响.首先一定要坚信一点,那就是核酸一定会与装它的容器的接触面发生反应,达到某种均衡.EP管的材质,首先可能吸附核酸,其次还可以诱导核酸的结构发生某些变化,如变性.在核酸的浓度比较高时,这个现象可能观察不到;当核酸浓度很低时,则比较明显了.如抽提的质粒电泳的构型越来越多,除了原来的三种带型外,还可能出现denaturedcc、multimericformsofcc等等带型.在低浓度的核酸中加入Geletin,Glycogen,BSA可以稳定核酸,虽然已经为实验所证明,但许多实验人员并没有将该建议当回事.…………………………………详细资料请参考:on