请提供一个聚丙烯酰胺凝胶电泳程序
这个东西说起来可麻烦了,建议你去学校图书馆借一些分子生物学实验指南之类的专业书看看,里面一般都有详细的protocol。
还有,是westen的还是做双向的?这些都要说清楚才好,不然你这一问,就是一个很大的范围了。 可以专门写本书了。
另外推荐一个网站,去那里看看或者参与人家的讨论,丁香园
简单给几个protocol:
6%聚丙烯酰胺凝胶电泳 电泳缓冲液为
pH8。0 的1×TBE;制胶用6%聚丙烯酰胺胶储存液
(UREA 420。 2g、Acrylamide 60。0 g、N’N-Methylenebisacrylamide
3。16 g、10×TBE 50 ml,定容至1 000 ...全部
这个东西说起来可麻烦了,建议你去学校图书馆借一些分子生物学实验指南之类的专业书看看,里面一般都有详细的protocol。
还有,是westen的还是做双向的?这些都要说清楚才好,不然你这一问,就是一个很大的范围了。
可以专门写本书了。
另外推荐一个网站,去那里看看或者参与人家的讨论,丁香园
简单给几个protocol:
6%聚丙烯酰胺凝胶电泳 电泳缓冲液为
pH8。0 的1×TBE;制胶用6%聚丙烯酰胺胶储存液
(UREA 420。
2g、Acrylamide 60。0 g、N’N-Methylenebisacrylamide
3。16 g、10×TBE 50 ml,定容至1 000 ml)
60 ml、10%过硫酸铵(APS)300 μl、TEMED 60 μl、
混合均匀后灌胶,胶型为380 mm/300 mm/0。
4 mm;电
泳程序为首先100W 预电泳30 min,插60 孔加样梳,
点样后80W 电泳60 min。
1。5。
3 银染程序:(1)脱色与固定:将胶板放入10%
冰醋酸中轻摇30min;(2)漂洗:用蒸馏水漂洗3 次,
每次3 min;(3)银染:1L 1%的AgNO3 溶液中加2 ml
37%的甲醛,放入胶板轻摇30 min;(4)蒸馏水漂洗
约20 s;(5)显影:在预冷的1L 30%的Na2CO3 溶液
中加2 ml 甲醛和200 μl 1% NaS2O3 溶液,放入胶板轻
摇直到目标片段显示出来;(6)终止:迅速将胶板转
入10%冰醋酸溶液中,终止显色反应;(7)用蒸馏
水漂洗2 min;(8)将胶板自然干燥后,记录带型并
用数码相机照相。收起