目前临床应用的自身抗体检测方法主
目前临床应用的自身抗体检测方法种类很多,包括:间接免疫荧光法(IFA )、酶联免疫 吸附试验(ELISA)、放射免疫法(RIA)、被动血凝法(PHA)、颗粒凝集法(PA)、对流免疫电 泳法(QE)、免疫(双)扩散法(ID或DID)、免疫印迹法(WB)、免疫条带法(IB)、免疫斑点 法(ID)、免疫沉淀法(RIP)、斑点酶免疫渗透试验(DIEFA)、斑点金免疫结合试验(DIGFA)、 化学发光法(CLIA)、悬浮芯片技术(xMAP)、芯片酶联免疫技术(Army -ELISA)和蛋白芯片 法(protein chip)等。 下面主要介绍几种临床常用的方法。
(1) 间接免疫荧光法(IIF)...全部
目前临床应用的自身抗体检测方法种类很多,包括:间接免疫荧光法(IFA )、酶联免疫 吸附试验(ELISA)、放射免疫法(RIA)、被动血凝法(PHA)、颗粒凝集法(PA)、对流免疫电 泳法(QE)、免疫(双)扩散法(ID或DID)、免疫印迹法(WB)、免疫条带法(IB)、免疫斑点 法(ID)、免疫沉淀法(RIP)、斑点酶免疫渗透试验(DIEFA)、斑点金免疫结合试验(DIGFA)、 化学发光法(CLIA)、悬浮芯片技术(xMAP)、芯片酶联免疫技术(Army -ELISA)和蛋白芯片 法(protein chip)等。
下面主要介绍几种临床常用的方法。
(1) 间接免疫荧光法(IIF):这是进行抗核抗体、抗核仁抗体和抗胞浆抗体筛选检测的 最有效方法。在此检测系统中,以组织培养细胞和器官的冷冻切片为反应底物。
(2) 免疫双扩散法(ID):免疫双扩散法过去称为“Ouchterlony试验”,是最早用于鉴定 系统性自身免疫性疾病中自身抗体特异性的检测系统。在此系统中,琼脂内抗体和抗原各 自向对方扩散,当抗原与抗体相遇便形成沉淀线。
鉴定抗原抗体系统时需参照标准血清。 当二者相同时,两条沉淀线在琼脂凝胶上形成一条连续的沉淀线。免疫扩散中形成的沉淀 线可用来鉴定如抗Sm、RNP、SS - A、SS - B抗体系统及许多前述的可沉淀性抗原抗体系统^
⑶对流免疫电泳(CIE) :CIE是免疫扩散的改良试验,采用电泳以加速抗原、抗体彼此 向对方移动的速度,从而^^在几小时内便可形成沉淀线,而免疫双扩散法则需1日的时 间。
在CIE中仅能检出与抗原相比为酸性等电点的抗体,但Cffi很易检出抗DNA、Sm、RNP 和SS-B的自身抗体。
(1) 免疫印迹法(WB):属膜载体酶免疫技术,其固相载体为吸附有ENA抗原的硝酸纤 维膜,待检血清中存在的抗ENA抗体分别与硝酸纤维膜上的相应抗原区带结合,当加入酶 标记人IgG抗体后形成酶标志抗体复合物,再加入酶的底物,出现显色反应。
参照此时抗原 区带的分子量及各区带的相对位置,可辨读出各特异的ENA抗体。目前该方法广泛用于自 身免疫性疾病患者血清中多种自身抗体的检测,如检测抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗SS - A 抗体及SS-B抗体等。
(2) ELISA!这一抗体检测系统十分敏感,但却非常依赖于抗原制品的纯度。通常以部 分纯化的组织提取物或部分纯化的重组抗原为底物,抗体与这些抗原发生反应后,加入能 显示抗体浓度的指示剂。
该系统存在两个问题,一个问题是部分纯化组织提取物中含有一 种以上的抗原或重组抗原,这些抗原可含有细菌产物(所检测的血清可能含有针对这些细 菌产物的抗体)。另一个问题是随着ELISA的敏感性增高,其特异性随之降低。
在ELISA 检测方法中,正常免疫球蛋白也可与抗原制品或与其本身发生非特异性结合。收起