调查日本吸血虫保虫宿主方法是什么?
日本血吸虫的保虫宿主种类较多,有40多种哺乳动物。对野生的、经济价值不高 的哺乳动物,可将动物处死后解剖其肝肠部分,肉眼观察有无虫卵结节,并用灌洗法冲洗门静脉和肠系膜静脉,观察是否有血吸虫成虫冲出。 而对家畜的检测,多采用病 原学和免疫学两种方法。病原学检查主要用于疫情调查和疗效考核,免疫学检查则多 用于家畜的选择性化疗。一、病原学诊断(粪便毛呦孵化法)1。材料准备(1) 水:pH值6。 8〜7。 2,无水虫和化学物质污染(包括氯气)的澄清水,否则需 做如下处理:有氯气的自来水应在盛器中存放8h以上。河水、池水、井水、雨水等混 有水虫的水加温至60°C,冷却后再用。或在50000ml...全部
日本血吸虫的保虫宿主种类较多,有40多种哺乳动物。对野生的、经济价值不高 的哺乳动物,可将动物处死后解剖其肝肠部分,肉眼观察有无虫卵结节,并用灌洗法冲洗门静脉和肠系膜静脉,观察是否有血吸虫成虫冲出。
而对家畜的检测,多采用病 原学和免疫学两种方法。病原学检查主要用于疫情调查和疗效考核,免疫学检查则多 用于家畜的选择性化疗。一、病原学诊断(粪便毛呦孵化法)1。材料准备(1) 水:pH值6。 8〜7。
2,无水虫和化学物质污染(包括氯气)的澄清水,否则需 做如下处理:有氯气的自来水应在盛器中存放8h以上。河水、池水、井水、雨水等混 有水虫的水加温至60°C,冷却后再用。或在50000ml水中加含30%有效氯的漂白粉 0。
35g,搅匀,放置20h,待氯气逸尽;也可在放漂白粉后加人硫代硫酸钠0。2〜0。4g 脱氯,0。5h后再用。对混池的水,于每50000ml水中加明矶3〜5g,充分搅拌,待水 澄清后用。(2)器材、试剂:竹篌、40〜80目的铜筛滤杯、260目的尼龙筛兜、500ml量杯、 粪桶、放大镜、显微镜、吸管、载玻片、盖玻片、取暖炉、水温计、盆、水缸、水桶、 剪刀、闹钟、天平、300〜500ml长颈平底烧瓶或200〜250ml三角烧瓶、脱脂棉。
(3)送粪卡:包括村名、组名、饲养员或畜主姓名、畜别、畜名或畜号、性别、 年龄、有无孕、采粪日期。(4)孵育室(箱)室温低于20°C时需有保持20°C〜25°C的环境条件,如有温箱或 有取暖设备的房间。
2。操作方法(1)采粪和送检:采粪季节宜于春秋两季,其次是夏季,不宜于冬季。采粪的时间最好于清晨从家畜直肠中采取,或新排出的粪便。采粪量:牛、马属200g,猪 l00g,羊和犬粪(农家)40g,每份粪样需附上填好的送粪卡,于采粪当天送到检 验室。
,(2)洗粪和孵化:将每头家畜的粪便分三份,每份粪量牛、马50g,猪20g,羊、 犬l0g。然后根据实际情况选用下列一种方法进一步操作。①尼龙兜淘洗孵化法:粪便在40目铜筛和量杯中用清水淘洗,细粪渣存于500ml 量杯中,待沉淀后去上清液,沉渣倒入尼龙兜用水冲淘洗,把尼龙兜中的粪渣装人三 角烧瓶或长颈平底烧瓶中加25°C左右清水,为便于观察毛呦,在瓶颈下二分之一处加 一块2〜3cm厚的脱脂棉,再加清水至瓶口。
②塑料杯顶管法:置粪于铜筛量杯中加水充分淘洗,弃去粪筛量杯中的上层水, 倒去三分之二,加25°C清水,盖上中间有孔的塑料盖再加满25°C清水,再将盛满水的 试管口塞一块2〜3cm厚的脱脂棉,倒插入塑料盖孔中。
(3)赙育:上述两种方法装好的三角烧瓶、长颈烧瓶或塑料杯放于20°C〜25°C的 箱(室)中,在一定的光照(日光或灯光)条件下进行孵育。从孵育开始到1、3、5h 后各观察一次,尾蚴多数在水面下2mm范围内呈直线运动。
发现血吸虫毛蚴即判定为 阳性。血吸虫毛蚴肉眼观察为针尖大小、灰白色、梭形、折光强和水中其他小虫不同 之处是在近水面做水平或斜向直线运动,当用肉眼观察难与水中的其他小虫相区别时, 可用滴管将毛蚴吸出,置显微镜下可见毛蚴前部宽,前段中间有个顶突,两侧对称, 后渐窄,周身有纤毛则可判为血吸虫毛蚴。
在一个样品中有1〜5个毛蚴为+,6〜10 个毛蚴为+ +,11〜20个毛蚴为+ + +,21个毛蚴以上为+ + + +。以判断、统计血 吸虫病感染的强度。二、家畜血吸虫病血清学诊断(间接血凝试验)1。
材料准备(1)器材:V型微孔有机玻璃血凝板(孔底角90°)、25/J定量移液器、滴管、可 插针头的滴管或1〜2ml注射器、12号针头。(2)生理盐水、蒸馏水。(3)诊断液和阴、阳性血清:按说明书处理和保藏。
2。操作方法(1)用滴管滴4滴生理盐水于血凝板左边第1孔内,用同一滴管加人被检血清1 滴,使血清成5倍稀释。(2)用带12号针头滴管或移液管在左边第2、3孔中各加生理盐水1滴(25M1)。(3)用移液器将第1孔血清混匀,混匀方法是反复吸吹三次,然后吸25^1已混匀 液加人右边邻孔中,此孔血清成1 : 10稀释。
(4)用移液器和步骤(3) —样混匀第2孔血清,吸取25M1加入第3孔中,此时该 孔血清成1 : 20稀释。(5)用移液器和(3) —样混匀第3孔血清,吸取25/xl丢弃。(6)每份被检血清和阳、阴性血清按同样方法用3个孔,也可不用阴性血清而设 生理盐水对照孔,此时另取2个孔各加25fxl生理盐水做空白对照。
(7)用带12号针头的滴管或移液管加人1 : 10、1 : 20血清稀释孔及空白对照孔 各1滴诊断液,使诊断液和血清混匀,置20°C〜37°C条件下1〜2h,等空白或阴性血 清对照孔中血球全部沉于孔底中央,呈一圆形红点,且阳性血清两孔中血球没有全部 沉人孔底中央即无圆形红点或仅有很小的圆形红点即可判定结果。
3。判定(1)判定标准:①红细胞全部下沉到孔底中央,形成紧密红色圆点,周缘整齐为阴性(一)。②红细胞少量沉于孔底中央,形成一较阴性小的红色圆点,周围有少量凝集红细 胞为弱阳性(+)。③红细胞约半数沉于孔底中央,形成一更小红色圆点,周围有一层淡红色凝集红 细胞为阳性(++)。
④红细胞均勻地分散于孔底,形成一淡红色薄层为强阳性(+++)。(2)结果判定:以血清10倍和20倍稀释孔出现2、3、4的凝集现象时,被检血清 判为阳性。(3)如阴性或生理盐水对照孔2h后红细胞沉淀图像不标准,说明生理盐水质量不 合标准或血凝板孔未洗净,需检查原因,重新操作。
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