遗传毒理学的以染色体为指标的方法
除用经典的染色体畸变分析方法外,近年还发展了下列方法:①微核测试法,以骨髓细胞或外周血淋巴细胞中微核的数量变化为指标的测试方法。各类染色体畸变中除易位、倒位或互换外一般常伴有无着丝粒断片的产生,这种断片在间期细胞的细胞质中呈现为一种圆形或椭圆形的结构──微核。 因此微核出现的数目可作为染色体畸变的指标。②姐妹染色单体互换测试法,在处于增殖状态的细胞培养物中添加5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),BrdU在细胞分裂的DNA合成期(S期)的DNA半保留复制过程中参入到新合成的DNA子链中,在BrdU持续存在两个细胞周期的情况下用吉姆萨染料对进入有丝分裂期M期的细胞进行染色。 由于在两个姐妹染...全部
除用经典的染色体畸变分析方法外,近年还发展了下列方法:①微核测试法,以骨髓细胞或外周血淋巴细胞中微核的数量变化为指标的测试方法。各类染色体畸变中除易位、倒位或互换外一般常伴有无着丝粒断片的产生,这种断片在间期细胞的细胞质中呈现为一种圆形或椭圆形的结构──微核。
因此微核出现的数目可作为染色体畸变的指标。②姐妹染色单体互换测试法,在处于增殖状态的细胞培养物中添加5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),BrdU在细胞分裂的DNA合成期(S期)的DNA半保留复制过程中参入到新合成的DNA子链中,在BrdU持续存在两个细胞周期的情况下用吉姆萨染料对进入有丝分裂期M期的细胞进行染色。
由于在两个姐妹染色单体的一个单体中BrdU参入了一个DNA单链,而在另一个单体中则参入了两个单链,因此两个单体间的染色便出现了色差(图2)。如果两个染色单体呈现对应的染色不连续部分,则说明姐妹染色单体间发生了互换。
在相对恒定的培养条件下,每个细胞出现的姐妹染色单体互换(SCE)次数也是相对恒定的,当培养物中再添加诱变剂,就可以看到SCE显著增加(图3)。用细胞中的SCE率来检测环境诱变剂,是一个简单、快速、灵敏的方法。
该法可以应用离体培养的细胞为材料,也可应用活体细胞为材料,在离体检验中可以模拟体内情况先用微粒体酶活化系统活化待检物以进一步提高检测的可靠性。上述各种方法各有其优缺点,艾姆斯测验简便、灵敏、快速、经济,但测试对象是原核生物,只宜对许多种类的化学物的诱变效应做初步筛选。
微核法简便易行,但只限于作为染色体畸变的辅助指标。SCE法灵敏度比常规染色体畸变分析高出成百倍,简便易行,有稳定的自发互换频率为对照,因而比较客观。但对电离辐射的敏感性却不如染色体畸变率的检测,因此仍需同染色体畸变分析结合应用。
其他还有DNA损伤修复的检测和离体培养细胞恶性转化试验等检测方法。应用环境因子的监测据估计目前城市居民接触的化学物质有6万或7万种以上,随着工业的发展,每年又有上千种新的化学物质进入人类社会。
用上述一系列方法结合果蝇和哺乳动物细胞的点突变(见基因突变)测验可对某一种可疑物质的遗传危害做出判断。收起