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巨噬细胞的培养方法有哪些?

巨噬细胞的培养方法有哪些?

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2016-02-02

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    巨噬细胞也建有无限细胞系培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞,以小鼠腹腔取材法最为实用,其法如下:1、实验前三天,向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml(勿注入肠内)。
  2、引颈杀死动物,手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精中3~5秒。3、置动物于解剖台上,用针头固定四肢,双手持镊撕开皮肤拉向两侧,暴露出腹膜,但勿伤及腹膜壁。  4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中,同时从两侧用手指揉压腹膜壁,令液体在腹腔内充分流动。
  5、用针头轻轻挑起腹壁,使动物体微倾向一侧,使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。6、小心拔出针头,把液体注入离心管中,250g4℃离心10分钟,去上清,加10mlEagle培养基。    7、计数细胞,每只小鼠可产生20~30×105细胞,其中90%为巨噬细胞。
  8、为获取3×105帖附细胞/平方厘米,需接种2。5×106/ml。9、为纯化培养细胞,去除其它白细胞,接种数小时后,去除培养液,用Eagle液冲洗1~2次后,再加新Eagle培养液置37℃CO2温箱中培养。
  

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