鹿的精子可以冷冻吗?
精子是结构复杂、具有运动力的细胞,经过低温保存后
能够复苏存活,对此研究者有许多学说,其中大家公认的是
玻璃化学说。水的存在有液态、固态、气态3种形态。固态 又分结晶态和玻璃态两种,精子冻结温度(冰点)是 -0。 6尤,低于此温度就会结冰,水分子形成结晶造成局部高
渗透压,精子脱水,原生质干涸。另外,由于体积增大等对 精子造成机械性损伤,破坏细胞膜,导致精子死亡。
精液在冷冻过程中,冰晶在-50
-0。 6丈时形成,其中, -25 -15尤对精子危害最大。为了避免产生冰结晶,必须快 速通过此区,而形成玻璃化结晶。因此,冷冻速度越快效果越 好。但直接把精子投入液氮中,又会对精子造成低温...全部
精子是结构复杂、具有运动力的细胞,经过低温保存后
能够复苏存活,对此研究者有许多学说,其中大家公认的是
玻璃化学说。水的存在有液态、固态、气态3种形态。固态 又分结晶态和玻璃态两种,精子冻结温度(冰点)是 -0。
6尤,低于此温度就会结冰,水分子形成结晶造成局部高
渗透压,精子脱水,原生质干涸。另外,由于体积增大等对 精子造成机械性损伤,破坏细胞膜,导致精子死亡。
精液在冷冻过程中,冰晶在-50
-0。
6丈时形成,其中, -25 -15尤对精子危害最大。为了避免产生冰结晶,必须快 速通过此区,而形成玻璃化结晶。因此,冷冻速度越快效果越 好。但直接把精子投入液氮中,又会对精子造成低温打击,造
成休克。
所谓玻璃化,是精子水分保持原来无次序排列,不形 成冰晶,而呈坚硬、均匀的团块,原生质没有明显脱水,细胞 不遭破坏,可以复苏。另外,保护物质甘油,能防止冷冻中精
子形成结晶。由于甘油吸水性强,在冰晶过程中限制水分子晶 格排列,使精子不发生脱水,并能缩短危险区。
现在冷冻精液有3种形式:安瓿冷冻冷冻、颗粒冷冻、
细管冷冻。这里只介绍颗粒冷冻与细管冷冻。①平衡,是指 稀释液中的甘油与精子在2 -5条件下互相作用的时间而言, 使甘油对精子起保护作用,达到保护的目的。
将稀释好的装
精液的容器用8层纱布包好,放在同温度水杯中,放在2- 5丈冰箱内,经lh可达到降温目的,再将甘油加入精液中,
平衡2 -4h。②滴冻,精液冻存剂型现在世界上主要有安瓿、 细管和颗粒3种。
现在最流行的是细管冻精。
颗粒冻精,20世纪50年代首次用于马。最初是在干冰穴
洞中滴冻,后来改进用在液氮灌蒸气上加铝板、铜纱网、氟
板等滴冻,由于剂量不十分标准,易受微生物污染,标记困
难,需解冻稀释,现场操作不便,不便大量、长期地保存, 颗粒表面裸露,互相摩擦,精子易脱落,现在应用的已不多。
细管精液是1936年前苏联米洛瓦诺夫首次使用。是将精
液装在芦苇或麦秆内冷冻,所以,今天仍将细管精液叫麦管 精液。1950年法国R。CaSS0u加以改进,后来用聚氯乙烯管, 并设计了一套封口、印标、控温、计数等一系列自动化装备,
目前在世界上被广泛使用。
鹿的精液冷冻目前处于小规模操作,还没有应用现代化
先进的技术装备(成套设备200万- 300万人民币),而是应 用较为原始的冷冻方法。
鹿的颗粒精液采取纱网滴冻和聚四氟乙烯板滴冻法。丨现
介绍氟板冷冻法、纱网冷冻法和细管冷冻法。
①氟板冷冻。 将液氮倒人广口保温瓶或其他容器内,然后将氟板放入液氮 内,使氟板距液氮面1。5 -2。 0cm,盖上容器盖,预冷5分钟。
用吸管吸取平衡好的精液,滴在氟板凹窝内,每lmL精液滴 10滴左右,滴完盖上容器盖,经3-5分钟将冻粒倒人液氮 中。
抽样检查,活力3。0者为合格,可长期保存备用。②纱 网冷冻。用孔径0。84 -0。
42mm (20-40目)铜网,将铜网 放在广口液氮容器内,铜网距容器口
7 - 8cm,距液氮面2 - 3cm,铜网中心温度是-120 - -801。
如没有温度计,可根 据滴冻时颗粒上是否出现一束上升的白烟雾来判断温度是否 适宜,并加以调整铜网距液氮面距离。滴冻前要将经平衡好
的精液混合均勻。每毫升精液滴10滴为宜,滴冻结束后盖上 容器盖,停留2-3分钟,然后将已冻精粒投入液氮中。
随机
抽样检查,解冻活率在0。3以上者为合格,可装入纱布袋中,
经标记后在液氮中保存。③细管精液冷冻。细管也叫麦管, 是用无毒塑料(聚氯乙烯)制成。容量有0。25mL和0。5mL 两种,管的一端填有棉塞和聚乙烯粉末,粉末遇水即固化自
动封口,输精时又成为推送精液的活塞。
另一端,在注人精 液后,可以以聚乙烯粉末或钢球(或塑料珠)封口,也可用 压闭法封口,要注意在封口处与精液间留有几毫米的空隙,
以防止在冷冻过程中因膨胀引起细管爆裂。细管精液铜网冷 冻,铜网距液氮容器口 7-8cm,距液氮面3 -4cm,网面温度 -120,将平衡后精液细管铺在铜网上,盖上容器盖,冷冻
8 - 10分钟,然后浸人液氣中。
抽样解冻活力0。 3以上者为合 格,装入纱布袋中,在液氮中冷冻保存。
细管冷冻具有卫生条件好、容积小、可快速冷冻、精子
损耗少、易标记和适于机械化生产等优点。细管精液在分装 前要用打印机作好标记,如公鹿品种、生产日期等。
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