如何正确地判断和分析免疫组化的结果？

    

(1) 首先要确定免疫组化技术是否合格，合格的染色结果应 该是背景颜色浅淡或无着色，而阳性标志物清晰和定位明确。切 片中的正常组织可以作为最简便的对照来判断染色结果的可靠与 否，例如用vimentin抗体，间质成纤维细胞和血管壁平滑肌细胞 胞浆应呈阳性。
  肯定为阳性的对照组织却呈阴性，待测组织的染 色结果也就不可靠；这现象常是由于抗体失效或过度稀释、组织 中抗原严重丢失等。  另一种现象是全片呈非特异性染色，实质细 胞、间质细胞和细胞外基质无区别地都呈黄色（以HRP酶标法 DAB为底物显色而言），抗原无明确定位。
  造成这种现象的原因 很多，如抗体质量问题、组织固定不佳、洗涤不充分、组织中有 能作用于底物的内源性酶（如过氧化物酶)、底物变质或显色时 间过长等。  上述两种情况都表明染色失败，不能作为判断的依 据。
  

不仅要判断所检组织中有或无阳性标记物，还要注意阳 性信号的分布部位和形态特征。一般说来，阳性信号应与被测抗 原所在的部位一致。此处所说的部位包括组织和细胞的不同区 域。如免疫复合物的Ig和补体可在肾小球毛细血管壁、系膜区 或间质血管壁上；细胞表达的抗原可在胞浆内、核内、胞膜上或 细胞外基质。
    病理医生应对于拟测抗原分布于何处有所了解。例 如Ki-67、PCNA、雌激素受体、孕激素受体、P53蛋白等定位 于胞核；EMA、Ki-1、LCA等为胞膜型抗原，但有时也在胞质

中。
  大部分细胞抗原位于胞质内，其中亦有区别，有的阳性颗粒 弥散于整个细胞的胞质，有的则呈斑块状局限于胞浆某处。  还有 些抗原同时分布于胞质和胞膜（如胃肠腺癌细胞的EMA)，或核 与胞质（如S-100、HMB-45)。
  同一种抗原在不同类型的细胞 可定位不同，因而分布的特点也有一定的鉴别意义，在此不一一 列举。

免疫组化染色结果与预期的不一致时应作具体分析，不要轻 易地否定或采用。  病理医生应了解以下几个与判断结果有关的因 素。
  ①细胞内的阳性标志物不一定是该细胞自身表达的抗原，而 可能是吞噬或吞饮的抗原物质；如间质中的巨噬细胞可摄入其他 细胞释放的抗原物质，因而常呈非特异性的阳性表现；恶性肿瘤 细胞侵袭破坏相邻的组织后也可摄入正常细胞的抗原，如恶性纤 维组织细胞瘤、恶性黑色素瘤可与邻近的正常上皮呈现相同的上 皮细胞抗原；甲状腺内的转移癌细胞可以呈甲状腺球蛋白阳性反 应，因而可能被误认为甲状腺原发癌；但肿瘤细胞的吞噬只是近 距离的，阳性细胞位于残存的正常组织附近；②肿瘤细胞和其相 应的正常细胞在抗原表达的质和量方面都可有所不同；抗原的定 位也可偏离一般规律，如正常细胞的膜型抗原在癌细胞却可定位 于胞质内。
    肿瘤细胞可出现异常的免疫表型，有时表达其它类型 细胞的抗原，例如偶尔可见恶性淋巴瘤细胞在T细胞性免疫标志 物阳性的同时呈B细胞的标志物SIg+。还可由于基因突变导致 其编码蛋白不表达或某些抗原决定簇缺失，可造成代表细胞分化 特征的抗原的不表现。
  这些现象不少见，使得对肿瘤免疫组化染 色结果的解释复杂化。  为解决这问题，可选用多种抗体以增加证 实或否定的依据，此外也要求病理医生积累经验和相关的知识； ③同一肿瘤中的瘤细胞是异质性的，这也反映在免疫标记阳性细 胞在肿瘤内的分布是不均勻的，甚至同一细胞巢中阴性和阳性细 胞并存；④同一种抗原的多克隆抗体和单克隆抗体的反应结果可 能是不同的。
    一般说来多克隆抗体的敏感性较高但特异性较差， 而单克隆抗体则相反。这是由于单克隆抗体对抗原决定簇的专一

性强；由不同克隆的杂交瘤细胞所产生的抗体，即使都作用于同 一种抗原，但所结合的抗原决定簇不同，使用时可能出现不同的 反应结果。
  例如在福尔马林固定的石蜡包埋组织中，部分抗原决 定簇被掩蔽，就可能出现用A克隆的单抗结果为阳性而用B克 隆的单抗结果为阴性。  因此采购和使用新的单克隆抗体时要注意 其克隆代号。
  

(2) 判断标志物阳性程度的方法，一是依着色强度，二是依 阳性细胞数在同类细胞中所占比例多少，二者亦可结合应用。阳 性程度的分等一般是粗略的，如仅为诊断目的而非为研究作的免 疫组化，判断结果常以定性为主。
  应了解，着色程度不仅取决于 抗原的含量和分布密度，还与抗体的敏感性、切片厚度、显色时 间等多种技术因素有关。
    但是在固定的技术条件下，比较染色反 应的强度对鉴别诊断仍有一定的参考意义，例如前述腺癌与间皮 瘤均可呈Vimentin阳性，但通常腺癌细胞弱阳性或部分细胞阳 性，而间皮细胞常为明确的阳性。[收起]