在营养缺陷型突变菌株筛选中，如何
。筛选营养缺陷型菌株般步骤和方法①诱变 常用紫外线等物理方法和化学诱变剂等诱变形成大量营养缺陷型菌株用15W或20W紫外灯管距离15cm～30cm照射10sec～20min照射受试菌前灯管须预热20min使灯光稳定菌悬液要磁力搅拌使所有单细胞或单孢子均匀受照射特别要注意应黑暗或红外光下操作接种器皿用黑布包严防止发生见光修复作用②淘汰野生型a）抗生素法 某些抗生素能杀死生长繁殖着微生物而对处于休止状态微生物无杀伤作用青霉素能抑制细菌细胞壁肽聚糖生物合成制霉菌素损伤真菌细胞膜二者分别杀死生长繁殖着细菌、真菌b）菌丝过滤法 适用于放线菌、霉菌等丝状微生物基本培养基野生型孢子能萌发长成菌丝体而营养...全部
。筛选营养缺陷型菌株般步骤和方法①诱变 常用紫外线等物理方法和化学诱变剂等诱变形成大量营养缺陷型菌株用15W或20W紫外灯管距离15cm～30cm照射10sec～20min照射受试菌前灯管须预热20min使灯光稳定菌悬液要磁力搅拌使所有单细胞或单孢子均匀受照射特别要注意应黑暗或红外光下操作接种器皿用黑布包严防止发生见光修复作用②淘汰野生型a）抗生素法 某些抗生素能杀死生长繁殖着微生物而对处于休止状态微生物无杀伤作用青霉素能抑制细菌细胞壁肽聚糖生物合成制霉菌素损伤真菌细胞膜二者分别杀死生长繁殖着细菌、真菌b）菌丝过滤法 适用于放线菌、霉菌等丝状微生物基本培养基野生型孢子能萌发长成菌丝体而营养缺陷型孢子则生长经诱变处理孢子接种于液态基本培养基振荡培养10h～12h使原养型萌发（肉眼刚能看见菌丝度）滤纸、棉花或玻璃过滤漏斗过滤菌丝被滤除未萌发缺陷型孢子能顺利通过从而达富集营养缺陷型目③检出缺陷型常用方法a）逐测定法（点种法）把经诱变处理并淘汰野生型菌液完全培养基上涂布分离培养长出每菌落分别点种基本培养基和另完全培养基上凡基本培养基上能生长而完全培养基相应位置上能生长菌落表明其营养缺陷型b）夹层培养法经诱变处理菌液稀释与基本培养基混匀并倾入平皿待凝固再加上薄层含菌基本培养基培养皿底长出菌落做上标记加上层完全培养基再经培养新出现菌落多数营养缺陷型（图3－31）此法适用于兼性厌氧细菌C）影印法 丝绒包直径小于平皿圆柱台上固定作影印接种工具灭菌备用经诱变处理并淘汰野生型菌液涂布于完全培养基表面上培养待长出菌落用影印接种工具此平板上轻按下另基本培养基平板上按下经培养基本培养基上长而完全培养基相应部位上生长菌落营养缺陷型④鉴定营养缺陷型——生长谱法 检出缺陷型菌株接种完全培养基上培养把生长菌体或孢子洗下离心清洗制成浓度107／ml～108／ml菌悬液取0。
1ml该悬液与基本培养基混匀倒皿冷凝并稍干燥分区加沾有各种营养物圆滤纸片培养观察生长反应筛选营养缺陷型过程必须注意表型延迟现象由于诱变剂般仅作用于DNA某单链故突变无法反映当代表型上需经DNA复制和细胞分裂才使表型发生变异此即表型延迟现象二。
富集和分离抗生素敏感菌营养缺陷型突变株抗生素法 抗生素加入原养型培养基（即培养基缺少营养缺陷型所需养分）能杀死生长野生型细胞而能生长突变株得幸免抗生素敏感菌营养缺陷型菌株筛选过程①菌悬液诱变处理②死和活野生型细胞及些活前突变细胞混合液C．M．培养使已发生营养缺陷突变细胞缺陷表型得充分表现若无阶段培养则许多细胞基因型虽已改变表型仍和野生型样些突变细胞接触抗生素时也被杀死③无氮培养液培养使营养缺陷型菌株细胞内所含养料尽量消耗便停止其生长繁殖④含抗生素M．M．培养杀死能生长野生型菌株⑤检出缺陷型⑥鉴定缺陷型。
三。
营养缺陷型科研和生产实践应用科学研究营养缺陷型既作研究代谢途径和杂交、转化、转导、原生质体融合等遗传规律所必少标记菌种也作氨基酸、维生素或碱基等生物测定试验菌种生产实践营养缺陷型作菌种杂交、重组育种和构建工程菌时所缺少带有特定基因标记亲本菌株们还常被用作生产核苷酸、氨基酸等代谢产物生产菌株由于营养缺陷型代谢途径某步骤发生缺陷致使终产物能积累从而遗传性地解除反馈抑制使间代谢产物或另分支途径末端产物得积累例用高丝氨酸营养缺陷型作赖氨酸生产菌株由于该突变株遗传性解除了赖氨酸与苏氨酸协同反馈抑制因此培养系统限量补充苏氨酸使天冬氨酸半醛全部向赖氨酸方向转化赖氨酸产量大大提高。收起
